細胞と対話し病変細胞を識別できる革新的な遺伝子キャリヤー

1.ペプチド修飾率および修飾量が遺伝子発現制御能に与える影響前年度に開発した直鎖ポリエチレンイミン-ペプチドコンジュゲートのペプチド導入率、および導入数を最適化するため、様々なペプチド導入率・数のコンジュゲートを作製した。作製したコンジュゲートとレポーター遺伝子(DNA)の複合体をヒト肝臓ガン細胞HepG2にトランスフェクションしたところ、最適なペプチド導入率および導入数は、高分子一分子あたりに6-10mol%および数十分子であることがはじめて明らかとなった。この結果は、効率的な遺伝子発現制御を達成するための重要な高分子設計の指針を示している。2.プロテインキナーゼCα(PKC)α活性の蛍光イメージングプローブ既存のガンの診断法はガンの「位置」を特定するのには優れているが、ガンがどのような状態にあるのかを認識することは難しい。一方、PKCは11種のアイソザイムを持つキナーゼであり、ガンの状態によりその活性が増減する。PKCαはすべてのガンのステージで活性亢進が認められるが、PKCβやPKCηはガンの転移期に活性化している。したがって、これらの活性を染色することができれば、ガンの「位置」情報に加えて、「状態」を評価することができ非常に有用なガン診断システムとなりうる。プローブはPKCα特異的なペプチドとCy5.5を修飾したポリカチオンおよびBHQ-3を修飾したポリアニオンからなる会合体である。この会合体はPKCαに応答前は蛍光が消光しているが、応答後は正電荷が減弱するため複合体が解離しCy5.5の蛍光が増幅する。たしかに、この会合体にPKCαを添加したところ、2時間後に蛍光強度が5倍程度増幅した。また、本プローブは非常に感度がよく、細胞抽出液中の低いPKCα活性に応答して、蛍光強度が増幅することも確認できた。しかしながら、動物では蛍光強度の増幅が見られなかった。

1.ペプチド修飾率および修飾量が遺伝子発現制御能に与える影響前年度に開発した直鎖ポリエチレンイミン-ペプチドコンジュゲートのペプチド導入率、および導入数を最適化するため、様々なペプチド導入率・数のコンジュゲートを作製した。作製したコンジュゲートとレポーター遺伝子(DNA)の複合体をヒト肝臓ガン細胞HepG2にトランスフェクションしたところ、最適なペプチド導入率および導入数は、高分子一分子あたりに6-10mol%および数十分子であることがはじめて明らかとなった。この結果は、効率的な遺伝子発現制御を達成するための重要な高分子設計の指針を示している。2.プロテインキナーゼCα(PKC)α活性の蛍光イメージングプローブ既存のガンの診断法はガンの「位置」を特定するのには優れているが、ガンがどのような状態にあるのかを認識することは難しい。一方、PKCは11種のアイソザイムを持つキナーゼであり、ガンの状態によりその活性が増減する。PKCαはすべてのガンのステージで活性亢進が認められるが、PKCβやPKCηはガンの転移期に活性化している。したがって、これらの活性を染色することができれば、ガンの「位置」情報に加えて、「状態」を評価することができ非常に有用なガン診断システムとなりうる。プローブはPKCα特異的なペプチドとCy5.5を修飾したポリカチオンおよびBHQ-3を修飾したポリアニオンからなる会合体である。この会合体はPKCαに応答前は蛍光が消光しているが、応答後は正電荷が減弱するため複合体が解離しCy5.5の蛍光が増幅する。たしかに、この会合体にPKCαを添加したところ、2時間後に蛍光強度が5倍程度増幅した。また、本プローブは非常に感度がよく、細胞抽出液中の低いPKCα活性に応答して、蛍光強度が増幅することも確認できた。しかしながら、動物では蛍光強度の増幅が見られなかった。