新奇RNA結合タンパク質・Wnterによる体軸形成とWntシグナルの制御機構

新型RNA结合蛋白Wnter对体轴形成和Wnt信号的控制机制

• 批准号: 08J04097
• 负责人: 宮本 達雄
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J04097/
• 关键词: 発生・分化; シグナル伝達

<研究目的>多細胞動物の発生過程において、前後、背腹、左右の体軸の形成とそれに伴う細胞の増殖・分化の分子機構の解明は、個体発生のメカニズムを理解する上で必要不可欠である。ツメガエルの背腹軸形成を制御する因子を、発現クローニング法によって探索した結果、Wntシグナル伝達系を特異的に促進する新奇RNA結合蛋白質・Wnterを同定した。本研究は、1)ツメガエル胚と培養細胞を用いたWnterの過剰発現および機能阻害実験によって、Wnterによる体軸形成と発生・分化の制御機構を明らかにする。また、2)Wnterの標的RNAを同定することによって、WnterによるRNAレベルでのWntシグナル伝達制御機構を解明する。これらの解析から、今まで研究が十分になされていないRNAレベルでの初期発生制御のメカニズムを明らかにする。<研究成果>平成19年度科研費若手(スタートアップ:代表・宮本達雄)では、ツメガエル初期胚のWnter過剰発現実験から、Wntシグナルを亢進する活性が確認された。平成20年度は、より定量的な解析が可能なヒト培養細胞を用いてWnterの過剰発現実験を行った。また、ツメガエル胚でのWnter機能阻害実験に使用するモルフォリーノアンチセンスオリゴ(MO)を設計した。<成果1>HeLa細胞において、Wnt刺激下で、WnterはAxin2などのWnt応答遺伝子の発現を亢進させる活性をもつことが明らかになった。<成果2>ツメガエル胚における内在性Wnterタンパク質を検出するために、ツメガエルWnterに対するウサギポリクロナール抗体を作製した。なお、平成19年度に作製したヒトWnter抗体は、ツメガエルWnterを認識できないので、あらたにツメガエルWnterを抗原にした抗体を作製した。さらに、ツメガエルWnter抗体を用いたウエスタン解析の結果、内在性Wnterタンパク質を効率的にノックダウンできるWnter MOの設計に成功した。

& the purpose of lt; research & the process of gt; polycytopathic cytokines birth is complicated, the front and back, dorsal abdomen, left and right sides of the body are involved in the formation of trophoblast associated with the molecular mechanism of cellular differentiation, and the understanding of the molecular mechanism of cellular differentiation is necessary. The formation of the control factor, the detection of the control factor, the exploration of the results, and the promotion of novel RNA-binding protein Wnter of the Wnt gene. The main results of this study are as follows: 1) in this study, 1) the use of Wnter in cell culture shows that the machine can prevent the formation of genetic differentiation in the system of genetic differentiation, which can be blocked by the machine. (2) the RNA of the Wnter engine is the same as that of the RNA system, and the system of the Imperial Authority is the same as that of the Wnt system. Today's research is very important. In the early days of the RNA study, there is a clear understanding of how to control the system. & lt; research results & gt; Pingcheng 19 scientific research (on behalf of the local male), the early stage of the disease, the early stage of the Wnter, the activity of the Wnt was increased. The quantitative analysis of Pingcheng 20 may be necessary to improve the quality of the Wnter system. The Wnter machine can prevent the use of the device. The MO device is designed to prevent the use of the device. & lt; result 1: GTX HeLa cell cycle, Wnt stimulation, Wnter Axin2 response, Wnt response, hyperactivity, hyperactivity, histopathology. & lt; results 2: GT; the results show that there is an internal Wnter virus in the body, and that the antibodies are known to be infected by antibodies. In 1919, Pingcheng and Pingcheng were tested for Wnter antibodies, Wnter antibodies, Wnter antigens and antibodies. The results of the analysis of Wnter antibodies by means of Elisa, the results of the analysis of intrinsic Wnter antibodies, and the success of the Wnter MO test of the rate of intrinsic HBV antibodies were successfully tested.