新奇RNA結合タンパク質・Wnterによる体軸形成とWntシグナル伝達の制御機構

新型RNA结合蛋白Wnter控制体轴形成和Wnt信号转导的机制

• 批准号: 19870015
• 负责人: 宮本 達雄
• 金额: $ 2万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-19870015/
• 关键词: 発生・分化; シグナル伝達

<研究目的> 多細胞動物の発生過程において、前後、背腹、左右の体軸の形成とそれに伴う細胞の増殖・分化の分子機構の解明は、個体発生のメカニズムを理解する上で必要不可欠である。ツメガエルの背腹軸形成を制御する因子を、発現クローニング法によって探索した結果、Wntシグナル伝達系を特異的に促進する新奇RNA結合蛋白質・Wnterを同定した。本研究は、1)ツメガエル胚と培養細胞を用いたWnterの過剰発現および機能阻害実験によって、Wnterによる体軸形成と発生・分化の制御機構を明らかにする。また、2)Wnterの標的RNAを同定することによって、WnterによるRNAレベルでのWntシグナル伝達制御機構を解明する。これらの解析から、今まで研究が十分になされていないRNAレベルでの初期発生制御のメカニズムを明らかにすることを目的とする。<研究成果> 平成19年度は、ツメガエル初期胚とヒト培養細胞を用いてWnterの過剰発現実験を行った。また、Wnter標的RNAの同定に使用する抗ヒトWnter(hWnter)抗体の作製を行った。<成果1> Wnter mRNAをXWnt8 mRNAとともにカエル胚に注入すると、XWnt8単独の場合に比べて背側化が亢進し、相乗的なWnt標的遺伝子の発現が得られた。また、HeLa細胞においても、WnterはWnt刺激によるWnt応答遺伝子の発現を亢進させる活性をもつことが明らかになった。<成果2> Wnterの標的RNAの同定に有効なCLIP法を行うための準備段階として、hWnterに対するポリクロナール抗体を作製した。Wnter-GFPを発現するHeLa細胞を用いた検討から、本抗体が、Wnterタンパク質を特異的に認識し、免疫沈降、免疫染色、ウエスタンブロットに使用できることが明らかとなった。

& the purpose of lt; research & the process of gt; polycytopathic cytokines birth is complicated, the front and back, dorsal abdomen, left and right sides of the body are involved in the formation of trophoblast associated with the molecular mechanism of cellular differentiation, and the understanding of the molecular mechanism of cellular differentiation is necessary. The formation of the control factor, the detection of the control factor, the exploration of the results, and the promotion of novel RNA-binding protein Wnter of the Wnt gene. The main results of this study are as follows: 1) in this study, 1) the use of Wnter in cell culture shows that the machine can prevent the formation of genetic differentiation in the system of genetic differentiation, which can be blocked by the machine. (2) the RNA of the Wnter engine is the same as that of the RNA system, and the system of the Imperial Authority is the same as that of the Wnt system. The purpose of this study is to improve the quality of the system in the early stage of the study, which is very important in the analysis and study of RNA. & lt; research results & gt; Pingcheng in the early years of the 19th century, the early stage of pregnancy in the early stage of embryo culture, the use of Wnter technology to achieve success. The anti-Wnter Wnter (hWnter) antibody was used to make the same determination of the RNA of the two drugs. & lt; results 1: GTH; Wnter mRNA XWnt8 mRNA drugs are injected into the embryos, XWnt8 drugs are injected alone, and the symptoms are higher than those of the Wnt patients. The stimulation of HeLa, HeLa, Wnt, Wnt, and so on showed that there was an increase in the activity of the cells. The RNA of lt; result 2: GT; the RNA of the CLIP method is the same. The CLIP method is used to prepare the segment, and the antibody is used to prepare the segment. Wnter-GFP showed that HeLa cells were infected with specific antibodies, antibodies, Wnter antibodies, immuno-sedimentation, immunostaining, and immunostaining.