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HIV感染者において発現が変動するmiRNAの網羅的解析

HIV感染者表达变化的miRNA综合分析

基本信息

批准号：
08J04845
负责人：
山本拓也
金额：
$ 0.38万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J04845/
关键词：
CD8T細胞 miRNA Central memory Effector memory HIV

项目摘要

本研究は、本来の細胞内に存在するmicroRNA(miRNA)を利用したHIV増殖抑制性レンチウイルスを作製するため、まずT細胞の分化段階に応じて発現するmiRNAを網羅的に解析し、それらmiRNAの発現フロファイルを健常人とHIV感染者間で比較することにより病態に関わるmiRNAを決定することを目的とした.具体的方法を以下に述べる。まず健常者血液由来PBMCを精製、ブローサイトメーターを用いて細胞の分化段階応じてCD4陽性、ならびにCD8陽性T細胞をソートした、ソートした細胞をRNAlaterで保存し、RNAqueous-Microにより全RNAを精製した、これらRNAを用いてmiRNAに物異的なブライマーを用いた逆転写と、その後のTaqManブローブを用いたReal time PCR解析を基にしたHuman MicroRNA Array(トータル365種願ヒトmiRNA)による網羅的定量的解析を行った。Taqman MicroRNA Arrayより得られたデータから、特にセントラルメモリーT細胞で発現量の高いmiRNA、ならびに既にT細胞以外のリンパ球で分化、機能制御に関わると報告されているmiRNAより計12種類のmiRNAに着目した。合計15人の健常者血液由来PBMCに関して定量PCRによるmiRNA発現解析を行った結果、セントラルメモリー細胞においてけmiR-20a、miR-146bが、エフェクターメモリーT細胞においてはmiR-155、mi-24が特に高発現している事が明らかとなった。以上、今回得られた健常者におけるmiRNA発現ブロファイルと比較し、今後HIV感染者における病態の進行と細胞に内在するmicroRNAの発現バターンを解析することにより、HIV増殖阻害効果のあるmiRNAを同定することが可能となる.このような研究は未だ報告が無く、その後のHIV増殖抑制性レンチベクターの開発へと発展することが出来れば、世界に先駆ける研究となる事期待れる。本年度はその上で期待通りの進展であったと考えられる。

This study aims to determine whether miRNA is involved in the regulation of HIV proliferation inhibition by microRNA(miRNA), which is present in cells, and in the differentiation stages of T cells. Specific methods are described below. The origin of PBMC in healthy individuals is purified, and the cells are used in differentiation stages. CD4 positive and CD8 positive T cells are stored in RNA. Real time PCR analysis of Human microRNA arrays (365 miRNAs) Taqman MicroRNA Array reports high levels of miRNA expression in T cells, miRNA expression in cells other than T cells, and miRNA expression in 12 miRNA species. A total of 15 healthy individuals had blood derived from PBMCs. Quantitative PCR was used to analyze miRNA expression. Results showed that miRNA expression in T cells was significantly higher than that in miR-20a, miR-146b, miR-155 and mi-24. The miRNA gene expression in healthy individuals was analyzed and compared with that in HIV-infected individuals in the future. This study has not yet been reported, and the future development of HIV proliferation inhibition is expected. This year, we are looking forward to the progress of communication.