HIV感染者において発現が変動するmiRNAの網羅的解析

HIV感染者表达变化的miRNA综合分析

• 批准号: 08J04845
• 负责人: 山本 拓也
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J04845/
• 关键词: CD8T細胞; miRNA; Central memory; Effector memory; HIV

本研究は、本来の細胞内に存在するmicroRNA(miRNA)を利用したHIV増殖抑制性レンチウイルスを作製するため、まずT細胞の分化段階に応じて発現するmiRNAを網羅的に解析し、それらmiRNAの発現フロファイルを健常人とHIV感染者間で比較することにより病態に関わるmiRNAを決定することを目的とした.具体的方法を以下に述べる。まず健常者血液由来PBMCを精製、ブローサイトメーターを用いて細胞の分化段階応じてCD4陽性、ならびにCD8陽性T細胞をソートした、ソートした細胞をRNAlaterで保存し、RNAqueous-Microにより全RNAを精製した、これらRNAを用いてmiRNAに物異的なブライマーを用いた逆転写と、その後のTaqManブローブを用いたReal time PCR解析を基にしたHuman MicroRNA Array(トータル365種願ヒトmiRNA)による網羅的定量的解析を行った。Taqman MicroRNA Arrayより得られたデータから、特にセントラルメモリーT細胞で発現量の高いmiRNA、ならびに既にT細胞以外のリンパ球で分化、機能制御に関わると報告されているmiRNAより計12種類のmiRNAに着目した。合計15人の健常者血液由来PBMCに関して定量PCRによるmiRNA発現解析を行った結果、セントラルメモリー細胞においてけmiR-20a、miR-146bが、エフェクターメモリーT細胞においてはmiR-155、mi-24が特に高発現している事が明らかとなった。以上、今回得られた健常者におけるmiRNA発現ブロファイルと比較し、今後HIV感染者における病態の進行と細胞に内在するmicroRNAの発現バターンを解析することにより、HIV増殖阻害効果のあるmiRNAを同定することが可能となる.このような研究は未だ報告が無く、その後のHIV増殖抑制性レンチベクターの開発へと発展することが出来れば、世界に先駆ける研究となる事期待れる。本年度はその上で期待通りの進展であったと考えられる。

は, this study had の に exists in cells す る micrornas (miRNA) を using し た HIV raised colonization inhibitory レ ン チ ウ イ ル ス を cropping す る た め, ま ず T cells の Duan Jie に 応 じ て 発 now す る micrornas を snare に analytic し, そ れ ら micrornas の 発 now フ ロ フ ァ イ ル を healthy normal と among people living with HIV で compare す る こ と に よ り pathological に masato わ る micrornas を decided す る こ と を purpose と し た. The specific method is を described below in に べる. ま ず health is often the blood origin PBMC を refined, ブ ロ ー サ イ ト メ ー タ ー を with い て cells の Duan Jie 応 じ て CD4 positive, な ら び に positive CD8 T cells を ソ ー ト し た, ソ ー ト し た cells を RNAlater で preservation し, RNAqueous - Micro に よ り all RNA を refined し た, こ れ ら RN A を use い て micrornas に content different な ブ ラ イ マ ー を with い た inverse planning write と, そ の after の TaqMan ブ ロ ー ブ を with い た Real time PCR analytic を base に し た Human miRNA The quantitative analysis of the Array(ト, ト, タ, タ, 365 kinds of ヒト mirnas)による net を rows った. Taqman miRNA Array よ り have ら れ た デ ー タ か ら, に セ ン ト ラ ル メ モ リ ー t-cell で 発 high amount is の い micrornas, な ら び に に T cells both outside の リ ン パ ball で differentiation, functional suppression に masato わ る と report さ れ て い る micrornas よ り 12 kinds の micrornas に with mesh し た. Total 15 people の health often blood origin PBMC に masato し て quantitative PCR に よ る micrornas 発 now line analytical を っ た results, セ ン ト ラ ル メ モ リ ー cells に お い て け miR - 20 a, miR - 146 b が, エ フ ェ ク タ ー メ モ リ ー t-cell に お い て は miR - 155 high, mi - 24 が に 発 now し て い る The matter is が Ming ら となった. Above, today back to ら れ た kin who often に お け る micrornas 発 now ブ ロ フ ァ イ ル と し and people living with HIV in future に お け る pathological の is と cells に す inner る mirnas の 発 now バ タ ー ン を parsing す る こ と に よ り, HIV raised colonization resistance against unseen fruit の あ る micrornas を with fixed す る こ と が may と な る. こ の よ う な study は not だ report が く, そ の の HIV raised after colonization inhibitory レ ン チ ベ ク タ ー の open 発 へ と 発 exhibition す る こ と が out れ ば, world first に 駆 け る research と な る thing expect れ る. This year, そ そ で is expected to see the progress of であったと examination えられる.

项目成果

樹状細胞の抗原提示に伴う Infectious Synapse を介したR5型HIV-1選択的伝播機構の解析

树突状细胞抗原提呈相关感染性突触介导的R5型HIV-1选择性传播机制分析

• 发表时间: 2008
• 作者: Terada;M.; Tsushima;D.; Nakano;M.;山本拓也
• 通讯作者: 山本拓也