Ras類縁分子Rap2の独自細胞機能に関するプロテオミクス的解析

Ras 相关分子 Rap2 独特细胞功能的蛋白质组学分析

• 批准号: 08J04908
• 负责人: 山城 義人
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: University of the Ryukyus
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J04908/
• 关键词: プロテオミクス的解析

所属研究室で癌遺伝子産物Rasの類縁分子Rap2がMAP4K (TNIK、MINK等)を介して細胞の形態、接着、極性、運動等を制御することが見いだされたが、これらの現象はJNK非依存的であった。本研究では、Rap2-MAP4K複合体によるJNK非依存性表現型の解析とRap2-MAP4K複合体により発現量やリン酸化状態が変化する蛋白質やRap2-MAP4K複合体に結合する蛋白質をプロテオミクス的手法で解析している。解析材料として、マウスに移植して扁平上皮癌を形成しても殆ど転移しない低転移性株と、この親株から樹立したRap2を発現しない高転移性株のペアを選び、ディファレンシャル二次元電気泳動(2D-DIGE)とMALDI-TOF/MSによるPMF法とMS/MS法で両細胞株の蛋白質発現プロファイルを比較した。その結果、本来は腺上皮など単層上皮で発現するサイトケラチン8および18が後者で異所性に発現していた。ウエスタン解析やRT-PCRでも同様の結果が得られ、免疫染色でも後者にのみ両ケラチンにより形成されたフィラメントを認めた。Rap2を発現しない高転移性株はin vitroで親株に比べ高い運動能・基底膜浸潤能を示したが、親株に両ケラチンを発現させると、運動能の促進と基底膜浸潤能の促進が見られた。さらに、附属病院の皮膚扁平上皮癌症例を対象に両ケラチンの免疫組織染色解析を行ったところ、形質転換したケラチノサイトが表皮基底膜を越えて浸潤した症例で陽性例の頻度が統計学的に有意に高く、両ケラチンの異所性発現が皮膚扁平上皮癌の浸潤に関与すると結論づけて報告した。

In our laboratory, Ras and MAP4K (TNIK, MINK, etc.), a cancer gene product, mediate cell morphology, adhesion, polarity, and motility. In this study, we analyzed JNK-independent phenotypes in Rap2-MAP 4K complexes and methods for protein expression and protein binding in Rap2-MAP 4K complexes. Analysis of the material and transplantation of squamous cell carcinoma formation, migration, low migration, parent plant establishment, rap2 development, high migration, selection, and secondary electrokinetic (2D-DIGE) and MALDI-TOF/MS method PMF/MS method Comparison of protein development of cell lines. As a result, the original glandular epithelium was found in the middle of the 8 th and 18 th layers of epithelium, and the latter was found in the middle of the 18 th layer of epithelium. The results of RT-PCR analysis and immunostaining were similar. Rap2 is found in highly migratory plants in vitro, higher in kinetic energy than in parental plants, higher in basement membrane infiltration energy, and higher in kinetic energy than in parental plants. The frequency of positive cases was statistically significantly higher than that of normal cases. Conclusion: There was a significant correlation between invasion of squamous cell carcinoma and abnormal appearance of squamous cell carcinoma.

项目成果

Rap2 function requires palmitoylation and recycling endosome localization.

Rap2 功能需要棕榈酰化和回收内体定位。

• 发表时间: 2009
• 期刊: Biochem. Biophys.Res.Commun. 378
• 作者: Uechi;Y.;Bayarjargal;M.;Umikawa;M.;Oshiro;M.;Takei;K.;Yamashiro;Y.;Asato;T.;Endo;S.;Misaki;R.;Taguchi;T.;Kariya;K.
• 通讯作者: K.