ショウジョウバエ生殖細胞特異的小分子RNA「piRNA」の生合成経路の解明

阐明果蝇生殖细胞特异性小RNA“piRNA”的生物合成途径

• 批准号: 08J07447
• 负责人: 西田 知訓
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Keio University (2010)The University of Tokushima (2008-2009)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J07447/
• 关键词: Primary piRNA; Armitage; Yb body; Nucleoporin; Importin β; Tudor; piRNA; Amplification loop; Aubergine; AGO3; dPRMT5; sDMA; Drosophila; germline; piRNA生合成; Maelstrom; 微小管形成; 対照的なジメチル化

ショウジョウバエPIWIタンパク質であるAGO3,Aubergine(Aub),Piwiは、生殖細胞特異的に発現し、piRNAと結合することによりトランスポゾン等の遺伝子発現を抑制している。piRNAは、Primary processing経路で最初に作られた後、Amplification loopにより増幅されると考えられている。これらpiRNA生合成経路については、未だ不明な点が多く存在する。私は、Aub、AGO3が修飾を介してTudと特異的に結合することを明らかにした。さらに、Tudは、Amplification loopにおいてpiRNAの品質管理で機能することが示唆された。しかし、Tudの詳細な機能については判っていない。以前の遺伝学的解析から、Armitage(Armi)は、piRNA生合成経路への関与が示唆されていた。そこで、piRNA生合成経路におけるTudとArmiの機能解析を試みた。生殖巣由来の体細胞株であるOSC (ovarian somatic cell)でArmiのRNAiを行うとprimary piRNAの量が減少した。また、ArmiはPiwi及びYbと三者複合体を形成していることが明らかになった。OSCでYbのRNAiにより、primary piRNAの量が減少することから、YbはArmiと同様にprimary piRNA生合成で機能する事が示唆された。Tudの機能を解析するため、卵巣内で特異的に結合する因子の同定を試みた。Tudは、多数の因子と結合していることが判明した。それら因子の質量分析により、ImportinβとNucleoporinを同定した。Importinβは卵巣の哺育細胞の核膜周辺に局在することからTudを核膜孔付近に留めておくことに関与していると推測する。または、NucleoporinがTudと直接的に結合することにより、Tudを核膜孔付近に留めているとも考えられる。Tudと核膜孔またはImpβとの共局在をみるため、野生型卵巣を用いてTudとImpβ、TudとNupの共染色を試みている。

シ ョ ウ ジ ョ ウ バ エ PIWI タ ン パ ク qualitative で あ る AGO3, Aubergine (Aub) may be required, PIWI は, germ cell specific に 発 し, piRNA と combining す る こ と に よ り ト ラ ン ス ポ ゾ ン etc. の heritage 伝 son 発 now を inhibit し て い る. piRNA えられて, Primary processing route で, after the initial に is performed られた, Amplification loopによ <s:1> increase されると test えられて る る. The <s:1> れらpiRNA biosynthetic pathway に れら て て, だ unknown な points が mostly く exist in する. Private は, Aub, AGO3 が modified を interface し て Tud と specific に combining す る こ と を Ming ら か に し た. さ ら に, Tud は, Amplification loop に お い て piRNA で の quality management function す る こ と が in stopping さ れ た. The detailed な function of に な て て て て judge って な な な. The previous analysis of the cultural heritage 伝 studies, including ら, Armitage(Armi), piRNA biosynthetic process へ <e:1> and が indications されて た た た. Youdaoplaceholder0 で で, piRNA biosynthetic pathway におけるTudとArmi <s:1> function analysis を test みた. The reproductive colony is derived from the somatic cell line であるOSC (ovarian somatic cell)でArmi <s:1> RNAiを the number of うとprimary piRNA が decreases た た. ま た, Armi は Piwi and び Yb と three complex を form し て い る こ と が Ming ら か に な っ た. OSC で Yb の RNAi に よ り, primary piRNA の decrease が す る こ と か ら, Yb は Armi と with others に primary piRNA biosynthesis function of で す が る things in business さ れ た. The Tud <s:1> function を analyzes するため, and the で specific に binding する factor <s:1> in the oocyte determines を test みた. Tud る and the majority <s:1> factor と combined with て る る とが determine <s:1>. Youdaoplaceholder0 factor <s:1> quality analysis によ によ, ImportinβとNucleoporinを are the same as <s:1> た. Importin beta は eggs 巣 の nurse cell の nuclear membrane weeks 辺 に bureau in す る こ と か ら Tud を nuclear pore paying nearly に leave め て お く こ と に masato and し て い る と speculation す る. ま た は, Nucleoporin が Tud と directly に combined す る こ と に よ り, Tud を nuclear pore paying nearly に leave め て い る と も exam え ら れ る. Tud と nuclear pore ま た は Imp beta と の total bureau in を み る た め, wild type egg 巣 を with い て Tud と Imp beta, Tud と Nup の were dyed を try み て い る.

项目成果

Functional involvement of Tudor and dPRMT5 in the piRNA processing pathway in Drosophila germlines

• DOI: 10.1038/emboj.2009.365
• 发表时间: 2009-12-16
• 期刊: EMBO JOURNAL
• 影响因子: 11.4
• 作者: Nishida, Kazumichi M.;Okada, Tomoko N.;Siomi, Mikiko C.
• 通讯作者: Siomi, Mikiko C.