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黄色植物における青色光受容体オーレオクロムの機能解析

黄色植物蓝光受体金色素的功能分析

基本信息

批准号：
08J07755
负责人：
石川美恵
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J07755/
关键词：
Aureochrome Blue light Flavin Fucus Heterologous expression Ochromonas blue-light Dictyopteris LOV domain morphogenesis aureochrome blue light receptor polarization Vaucheria

项目摘要

本年度の研究は、ドイツ連邦共和国、マックスプランク生物無機化学研究所、Wolfgang Gaertner教授の研究室で行った。ヒバマタオーレオクロム2およびオクロモナスオーレオクロム1の全長遺伝子をそれぞれpET28aベクターに導入し、タンパク質発現用の大腸菌Rosetta (DE3)pLysS内で発現を試みた。既に公表されているフシナシミドロオーレオクロム1の条件では発現しなかったため、発現条件の検討を行い、IPTG濃度200μM、温度22℃、overnight(12-16時間)、暗条件下での振とう培養でヒバマタオーレオクロム2およびオクロモナスオーレオクロム1の発現に成功した。その後の比較で、オクロモナスオーレオクロム1がより安定して発現したため以後のタンパク質精製にはオクロモナスオーレオクロム1を用いた。オーレオクロムタンパク質の精製はニッケルレジンを用いたイミダゾール溶出で行い、精製したタンパク質のイミダゾールを除去後、その分光学的特徴を解析した。オクロモナスオーレオクロム1の吸収スペクトルは、422, 448, 480nmのピークを示し、青色光照射によって、この範囲の吸収が減少し、代わって390nmの吸収が上昇した。これらの性質は、他のフラビンを結合するLOV光受容体と同様の特徴であり、オクロモナスオーレオクロム1が光受容能力を持つ事を示唆する。この結果と各オーレオクロムのアミノ酸配列比較から、ヒバマタオーレオクロム2も光受容能をもつ可能性が強く示唆される。すなわち、LOVドメイン中のフラビン結合に必要なアミノ酸の同義置換はフラビンとの結合に影響を与えない事が示唆された。

This year, the research institute, the Republic of China, the Institute of Bioinformatics and Professor Wolfgang Gaertner have been involved in this year's research. Do you want to use the Rosetta (DE3) pLysS in the Rosetta (DE3) pLysS to make sure that you can gain access to a full-grown child? This is not only a public table, but also a series of conditions. The temperature is 22 ℃, overnight (12-16 time), the temperature is 22 ℃, overnight (12-16 time), and in dark conditions, the temperature is 22 ℃, overnight (12-16 time), and in the dark, the temperature is high. In the back, please tell me that you are going to find out that you are safe and sound in the future. This is the first time to analyze the characteristics of the optics after the removal of the solution. In the first place, there is no significant difference between the two groups. 422,448, 480nm, blue light, low temperature, low temperature, low temperature, In combination with the LOV photoreceptive system, the light receptive capacity of the patient is significantly higher than that of the control group. The results show that the performance of each system is higher than that of the system, and the results show that the possibility of photocapacitance is very high. It is necessary to combine the information in the information system and LOV system to show that you are instigated by the combination of information and information.