葉緑体型チオレドキシンと標的蛋白質の親和性解析による還元力ネットワークの解明

通过叶绿体型硫氧还蛋白和靶蛋白的亲和力分析阐明还原力网络

• 批准号: 08J08443
• 负责人: 原 怜
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J08443/
• 关键词: チオレドキシン; 親和性; 還元力; SPR; 葉緑体

チオレドキシンは活性部位にシステインを2つ持つジスルフィド還元蛋白質である。還元型のチオレドキシンは酸化型の標的蛋白質を還元し、自身は酸化型になる。細胞内では還元型・酸化型の標的蛋白質が混在しているが、還元型チオレドキシンは酸化型の標的蛋白質のみと結合し還元する事が必要である。また、ジスルフィド還元反応の終了後には還元型となった標的蛋白質と酸化型チオレドキシンはすばやく解離することで、標的蛋白質はその機能を発揮できると考えられる。すなわち、チオレドキシンと標的蛋白質はその酸化還元状態に応じて親和性を変化させていると考えられる。また、チオレドキシンは多種の標的蛋白質と相互作用することが知られている。そこで、標的蛋白質の種類によって親和性が異なることが予想される。これらを評価するために表面プラズモン共鳴法を用いて、相互作用を直接観察することを目的とした。前年度に引き続き、表面プラズモン共鳴法による相互作用測定の実験系の確立を行った。具体的には測定時のバッファー条件の検討などを行い、測定系を改善した。この結果から、活性部位のシステインをセリンに置換したジスルフィド還元能のないチオレドキシンが標的蛋白質の酸化還元見分ける事ができること、また、このチオレドキシン変異体と酸化型標的蛋白質の解離には標的蛋白質の還元が必須であることを見出した。さらに、標的蛋白質自身の機能に応じて、チオレドキシンとの相互作用速度が異なっていることが示唆された。

チオレドキシンは active site にシステインを2つhold つジスルフィドrestored protein である. Reduced type のチオレドキシンは acidified type のtarget protein をrestored し, self-acidified type になる. It is necessary to mix the reduced and acidified proteins in the cell, and to combine the reduced and acidified proteins in the cells. After the completion of the また, ジスルフィドreduction reaction, the にはreduction type となったlabeled protein and the acidified type チオレドキシンはすばやく dissociation することで, the target protein はそのfunction を発水 できると考えられる.すなわち, チオレドキシンと target protein はその acidification reduction state に応じて affinity を変化 させていると考えられる.また、チオレドキシンは Various target proteins and interactions することが知られている. The type and affinity of the target protein are different.これらを Commentary 価 するために Surface プラズモン Resonance method を Use いて, interaction を Direct observation する ことを purpose とした. In the previous year, the establishment of the system of measuring the interaction between the surface プラズモン resonance method and the の実験 system was established. The specific measurement conditions are the same as the measurement conditions and the measurement system is improved.このRESULTから、ACTIVE PART のシステインをセリンにSUBSTITUTEのないチオレドキシンがAcidification and reduction of target proteinsる事ができること, また, このチオレドキシン変 isomeric and acidified target The dissociation of the protein and the reduction of the target protein must be done in a clear way.さらに, the target protein's own function, に応じて, チオレドキシンとのinteraction speed, がdifferent なっていることが Show 唆された.