c-Ablの機能的複合体形成における動的活性制御機構の解析

c-Abl功能复合物形成动态活性控制机制分析

基本信息

批准号：
08J09696
负责人：
圓岡真宏
金额：
$ 0.77万
依托单位：
Kyoto University (2009)Nara Institute of Science and Technology (2008)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J09696/
关键词：
Bcr-Abl c-Abl Abi-1 VASP c-Ab1 BCR-Ab1

项目摘要

c-Ablの酵素活性がアダプタータンパク質Abi-1により制御されるという機構から、前年度までに新規基質としてVasodilator-stimulated phosphoprotein(VASP)を同定し、その詳細なリン酸化機構についても解析を行った。本年度はVASPのリン酸化による細胞内機能の解明に焦点をあてて研究を行った。VASPのリン酸化はBcr-Ablでガン化した白血病細胞に共通に認められることが報告されている。VASPのリン酸化による機能変化を検討するため、VASPの偽リン酸化型変異体を作製し、細胞内局在を解析した。その結果、VASPは野生型と比較して接着班への局在が有意に低下することが線維芽細胞を用いた解析で明らかになった。さらに、精製タンパク質を用いた解析結果から、その結合分子として知られているZyxinとの親和性が低下することが明らかになった。Zyxinは接着班に局在するタンパク質であり、Zyxin欠損細胞はVASPの接着班への局在が消失することから、AblによるVASPのリン酸化は、Zyxinとの相互作用を阻害する働きをもつものと考えられる。一方、偽リン酸化型VASPを発現する白血病細胞は、リン酸化されないVASPを発現する細胞と同様に、対称細胞と比較して有意に細胞接着能が低下することが分かっている。このことからVASPのリン酸化は、脱リン酸化を伴うことで白血病細胞の接着性の亢進に役割をもっものと考えられる。Bcr-Ablによる白血病の発症において、Abi-1が介在する基質のリン酸化機構の証明と、その具体的基質であるVASPの同定、さらにはVASPのリン酸化における白血病細胞の接着能への関与を明らかにしたことは、白血病の発症機構を理解する上で新たな手掛かりとなる新しい知見となると考えられる。

由于机制是C-ABL的酶活性受衔接蛋白ABI-1的调节，因此在上一年之前，还将血管扩张剂刺激的磷蛋白（VASP）鉴定为新的底物，并分析了详细的磷酸化机制。今年，我们专注于通过VASP的磷酸化阐明细胞内功能。据报道，在用BCR-ABL致癌的白血病细胞中通常观察到VASP磷酸化。为了研究VASP磷酸化引起的功能变化，产生了伪磷酸化的VASP突变体，并分析了亚细胞定位。结果，使用成纤维细胞的分析表明，与野生型相比，在粘附斑块的定位中VASP显着降低。此外，使用纯化蛋白质的分析结果表明，与Zyxin（称为其结合分子）的亲和力减少了。 Zyxin是一种位于粘附段的蛋白质，缺乏Zyxin的细胞将VASP定位在粘附段中，因此ABL通过ABL磷酸化的磷酸化被认为具有抑制与Zyxin相互作用的作用。另一方面，已经发现表达伪磷酸化的VASP的白血病细胞与对称细胞相比显着降低了细胞粘附能力，就像表达非磷酸化VASP的细胞一样。因此，认为VASP的磷酸化伴随着去磷酸化，在增加白血病细胞粘附方面起作用。在由BCR-ABL引起的白血病的发展中，ABI-1介导的底物的磷酸化机制的证据，对其特定底物VASP的鉴定及其参与白血病细胞在VASP磷酸化中的综合能力的参与，被认为是为了理解Leukemia开发机构的新发现，是新发现的新发现。