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低酸素下におけるサイトカイン産生変動機序-メチル化の関与

缺氧条件下细胞因子产生变化的机制——甲基化的参与

基本信息

批准号：
08J56251
负责人：
青井陽子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J56251/
关键词：
低酸素 MCP-1 DNAメチル化ヒストンメチル化

项目摘要

昨年度までに我々は、IL-1β刺激によりMCP-1エンハンサー領域におけるDNAメチル化が減少し、IL-1β/低酸素の共処置によりMCP-1プロモーターにおけるDNAメチル化および抑制型ヒストンメチル化H3K9me2が増加することを明らかにした。その中でDNAメチル化阻害剤5-aza-dCを用いてIL-1β/低酸素の共処置下におけるMCP-1発現抑制機序へのDNAメチル化の関与を示したが、低酸素の単独刺激によるMCP-1発現抑制は5-aza-dC処置により消失しなかった。そこで、IL-1β刺激の有無により低酸素下MCP-1発現抑制機序の違いがあるかを明らかにするため、無刺激下および低酸素単独刺激下におけるヒストンメチル化の経時的変化をChIP法にて検討した。結果、活性型H3K4me3レベルおよび抑制型H3Kme2レベルの両者とも低酸素単独刺激の影響を受けなかったことより、ヒストン脱アセチル化などの他の機序の関与が考えられる。また、以前BSP法を用いて得たMCP-1プロモーターにおけるDNAメチル化の結果を再確認するため、5-Methyl Cytosine抗体を用いてChIP法を行ったところ同様の結果を得ることができ、MCP-1プロモーター内のDNAメチル化増加をさらに裏付ける結果となった。一方、低酸素下におけるMCP-1プロモーター内のDNAメチル化増加が遺伝子特異的な反応であるか確認する目的で、今年度はグローバルなDNAメチル化レベルを免疫染色法、DNAメチル化酵素・脱メチル化酵素活性を比色法を用いて検討した。今回用いたHeLa細胞においてはIL-1β刺激及び低酸素刺激の有無に関わらず、グローバルな5-Methyl Cytosine発現、DNAメチル化酵素・脱メチル化酵素活性に違いは認められなかった。つまり本研究で用いた条件下では、低酸素下におけるDNAメチル化の増加現象は遺伝子特異的な反応であると考えられる。

In the past year, IL-1β stimulated MCP-1, IL-1β and IL-1 β co-processing decreased DNA methylation and inhibited DNA methylation of H3K9me2. In addition, MCP-1 gene expression inhibition mechanism was detected by 5-aza-dC co-treatment with IL-1β/low-acid, and MCP-1 gene expression inhibition mechanism disappeared by 5-aza-dC co-treatment with low-acid. The inhibition mechanism of MCP-1 production was investigated by ChIP method in the presence or absence of IL-1β stimulation, in the absence of IL-1β stimulation, and in the presence or absence of IL-1 β stimulation. The results showed that the active H3K4me3 and the inhibitory H3Kme2 were affected by the effects of low acid alone stimulation. 5-Methyl Cytosine antibody was used to reconfirm the results of MCP-1 amplification by ChIP method. To investigate the effect of MCP-1 on DNA methylation under low acidity, DNA methylation and enzyme activity colorimetry. HeLa cells were used to detect IL-1β-stimulated, 5-Methyl Cytosine (5-Methyl Cytosine)-stimulated and 5-Methyl Cytosine (5-Methyl Cytosine)-stimulated DNA. In this study, DNA amplification was observed under low pH conditions, and DNA amplification was observed under low pH conditions.