初代肝培養細胞を用いた、HCV感染時におけるアポトーシスの解析

原代肝培养细胞HCV感染过程中细胞凋亡分析

• 批准号: 08J56461
• 负责人: 犬伏 祥子
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J56461/
• 关键词: HCV; C型肝炎ウイルス; アポトーシス

昨年度、我々はヒト初代肝培養細胞(HuS-E/2 cell)におけるHCV複製効率は非常に低い事を明らかにした。本年度は、より複製効率をあげるため、より生体に近い感染実験系を構築し、HuS-E/2細胞を用いた3次元培養を試みた。今回我々は、Thermoreversible gelation polymer gel(TGP gel)を用いHuS-E/2 cellを3次元培養下でpre-cultureした後、HCVを感染させ、細胞内HCV RNAについてreal-time PCR法で解析したところ、感染後HCV RNA量は経時的に減少した。しかし、数日後からHCV RNA量の増加が認められた。また、HCV RNA量においては2次元培養した時と比べ、有意に複製が増加している事が明らかとなった。次に、この感染効率の上昇は何に起因しているのかを明らかにする事を試みた。現在、HCVのentryに必要な分子は主として、tetraspanin CD81,scavenger receptor B-1(CE-B1)及びタイトジャンクション分子であるClaudin1およびoccludin等が報告されている。今回我々は、2次元培養時、および3次元培養時におけるCD81, Claudin1, Occludinの細胞内局在について検討したところ、HuS-E/2細胞の3次元培養時においてClaudinは細胞膜上に局在するのに対し、2次元培養時においては細胞質および核内に局在している事が明らかとなった。CD81およびOccludinにおいては2次元および3次元培養時共に細胞膜上に局在している事が明らかとなった。今後、3次元培養感染系を用いて、caspase-3等のアポトーシスマーカーについて解析し、HCV感染による細胞増殖抑制がアポトーシスによるものかを明らかにしようと考えている。

Last year, it became clear that the HCV replication efficiency in our primary cultured liver cells (HuS-E/2 cells) was very low. This year, HuS-E/2 cells were cultured in three dimensions. In this paper, we use Thermoreversible gelation polymer gel(TGP gel) in HuS-E/2 cells under three-dimensional culture, HCV infection, intracellular HCV RNA analysis in real-time PCR, HCV RNA amount after infection is reduced. The amount of HCV RNA increased several days later. HCV RNA production is increasing in 2D culture, and replication is increasing intentionally. What causes this increase in infection rates? Now, the molecules necessary for HCV entry are reported as Claudin1 and occludin, tetraspanin CD81,scavenger receptor B-1(CE-B1), and other molecules. This time, when we were in 2D culture, when we were in 3D culture, when we were in CD81, Claudin1, Occludin, when we were in 3D culture, when we were in 3D culture, Claudin, when we were in 3D culture, when we were in 2D culture, when we were in cytoplasm, when we were in nucleus, when we were in 2D culture, Claudin, when we were in membrane, when we were in 3D culture, when we were in cytoplasm, when we were in nucleus. CD81 In the future, the use of three-dimensional culture infection system, caspase-3, etc., will be analyzed, and HCV infection will be inhibited.

项目成果

ペグインターフェロン/リバビリン併用療法におけるHCV Core およびNS5Aの多様性によるSVR予測因子とNon-SVR予測因子の検討

根据聚乙二醇干扰素/利巴韦林联合治疗中的 HCV 核心和 NS5A 多样性检查 SVR 预测因子和非 SVR 预测因子

• 发表时间: 2008
• 作者: 野川晃佑;小嶋勝;中島正博;本間道夫;福田敏男;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;Sachiko Inubushi;El Shamy Ahmed
• 通讯作者: El Shamy Ahmed

Hepatitis C virus NS5A protein interacts with and negatively regulates the non-receptor protein tyrosine kinase Syk

• DOI: 10.1099/vir.0.83510-0
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY
• 影响因子: 3.8
• 作者: Inubushi, Sachiko;Nagano-Fujii, Motoko;Hotta, Hak
• 通讯作者: Hotta, Hak