初代肝培養細胞を用いた、HCV感染時におけるアポトーシスの解析

原代肝培养细胞HCV感染过程中细胞凋亡分析

• 批准号: 08J56461
• 负责人: 犬伏 祥子
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08J56461/
• 关键词: HCV; C型肝炎ウイルス; アポトーシス

昨年度、我々はヒト初代肝培養細胞(HuS-E/2 cell)におけるHCV複製効率は非常に低い事を明らかにした。本年度は、より複製効率をあげるため、より生体に近い感染実験系を構築し、HuS-E/2細胞を用いた3次元培養を試みた。今回我々は、Thermoreversible gelation polymer gel(TGP gel)を用いHuS-E/2 cellを3次元培養下でpre-cultureした後、HCVを感染させ、細胞内HCV RNAについてreal-time PCR法で解析したところ、感染後HCV RNA量は経時的に減少した。しかし、数日後からHCV RNA量の増加が認められた。また、HCV RNA量においては2次元培養した時と比べ、有意に複製が増加している事が明らかとなった。次に、この感染効率の上昇は何に起因しているのかを明らかにする事を試みた。現在、HCVのentryに必要な分子は主として、tetraspanin CD81,scavenger receptor B-1(CE-B1)及びタイトジャンクション分子であるClaudin1およびoccludin等が報告されている。今回我々は、2次元培養時、および3次元培養時におけるCD81, Claudin1, Occludinの細胞内局在について検討したところ、HuS-E/2細胞の3次元培養時においてClaudinは細胞膜上に局在するのに対し、2次元培養時においては細胞質および核内に局在している事が明らかとなった。CD81およびOccludinにおいては2次元および3次元培養時共に細胞膜上に局在している事が明らかとなった。今後、3次元培養感染系を用いて、caspase-3等のアポトーシスマーカーについて解析し、HCV感染による細胞増殖抑制がアポトーシスによるものかを明らかにしようと考えている。

去年，我们透露，人原发性肝培养细胞（HUS-E/2细胞）的HCV复制效率非常低。为了提高复制效率，我们构建了一个接近生物体的感染实验系统，并尝试使用HUS-E/2细胞进行3D培养。在本文中，我们使用可爱的凝胶（TGP凝胶）在3D培养中预培养了HUS-E/2细胞，然后被HCV感染，并使用实时PCR分析了细胞内HCV RNA，并发现随着时间的推移，感染后HCV RNA的量减少。但是，几天后观察到HCV RNA量的增加。此外，与在二维培养时相比，HCV RNA量的复制显着增加。接下来，我们试图确定是什么原因导致了感染效率的提高。目前，进入HCV所需的分子主要是四叠蛋白CD81，清道夫受体B-1（CE-B1）和紧密的连接分子Claudin1和Occludin等。在这项研究中，我们研究了2D和3D培养物期间CD81，Claudin1和occludin的亚细胞定位，发现Claudin在HUS-E/2细胞（在3D培养物中，Claudin均位于2D培养时的细胞质和核中，Claudin位于细胞膜上。据显示，CD81和occludin位于2D和3D培养物中的细胞膜上。将来，我们计划使用3D培养物感染的系统分析凋亡标记，例如caspase-3，以确定HCV感染引起的细胞增殖抑制是否由凋亡引起。

项目成果

ペグインターフェロン/リバビリン併用療法におけるHCV Core およびNS5Aの多様性によるSVR予測因子とNon-SVR予測因子の検討

根据聚乙二醇干扰素/利巴韦林联合治疗中的 HCV 核心和 NS5A 多样性检查 SVR 预测因子和非 SVR 预测因子

• 发表时间: 2008
• 作者: 野川晃佑;小嶋勝;中島正博;本間道夫;福田敏男;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;野川晃佑;Sachiko Inubushi;El Shamy Ahmed
• 通讯作者: El Shamy Ahmed

Hepatitis C virus NS5A protein interacts with and negatively regulates the non-receptor protein tyrosine kinase Syk

• DOI: 10.1099/vir.0.83510-0
• 发表时间: 2008-05-01
• 期刊: JOURNAL OF GENERAL VIROLOGY
• 影响因子: 3.8
• 作者: Inubushi, Sachiko;Nagano-Fujii, Motoko;Hotta, Hak
• 通讯作者: Hotta, Hak