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Bent promoter of epsilon-toxin gene from Clostridium perfringens : analysis and application to protein expressions.

产气荚膜梭菌ε-毒素基因的弯曲启动子：分析及其在蛋白质表达中的应用。

基本信息

批准号：
20590448
负责人：
MIYATA Shigeru
金额：
$ 3万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

Phased A-tracts form a bent structure of DNA. We found a novel type of bent DNA structure, which stimulates the gene transcription, downstream of a Clostridium perfringens epsilon-toxin promoter. When we compared the temperature dependency of gene transcription from epsilon-toxin promoter to those from other bending promoters, alpha-toxin and ferredoxin promoters ; epsilon-toxin, alpha-toxin and ferredoxin promoters exhibit high-level transcription at 37℃, 25℃ and over a wide rangeof temperature, respectively. Thus, we constructed a novel expression vector using ferredoxin promoter to express efficiently large clostridial proteins in C.perfringens. Our expression system was successfully applied to produce large amounts of ColH, NagH, NagJ, NanJ, and BgaA, which are poorly expressed in Escherichia coli expression system. These proteins were purified in sufficient amounts from the supernatants of the recombinant C.perfringens cultures.

相A束形成了DNA的弯曲结构。我们发现了一种新型的弯曲DNA结构，它可以刺激基因转录，位于产气荚膜梭菌epsilon毒素启动子下游。当我们比较epsilon毒素启动子和其他弯曲启动子、α毒素启动子和铁氧还蛋白启动子的基因转录的温度依赖性时，epsilon毒素、α毒素和铁氧还蛋白启动子分别在37℃、25℃和较宽的温度范围内表现出高水平的转录。因此，我们构建了一种利用铁氧还蛋白启动子在产气荚膜梭菌中高效表达大型梭状芽胞杆菌蛋白的表达载体。我们的表达系统成功地表达了大量在大肠杆菌中表达水平较低的ColH、NagH、NagJ、NanJ和BgaA。从重组产气荚膜梭菌培养上清液中纯化了足够量的这些蛋白。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

High-level production and purification of clostripain expressed in avirulence-attenuated strain of Clostridium perfringens

产气荚膜梭菌无毒力减毒菌株中表达的梭菌蛋白酶的高水平生产和纯化

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
Protein Expression and Purification
影响因子：
1.6
作者：
Lei XF;Fujiwara Y;Chang CCY;Chang TY;Takeya M;Sakashita N;Hiroaki Tanaka
通讯作者：
Hiroaki Tanaka

ホームページ等。

主页等

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

ウェルシュ菌の糖鎖分解酵素群の解析

产气荚膜梭菌糖酵解酶的分析

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
宮田茂;成谷宏文;鈴木基生;南純三朗;岡部昭延
通讯作者：
岡部昭延

ウェルシュ菌イプシロン毒素の腸管透過性

产气荚膜梭菌ε毒素的肠道通透性

DOI：
发表时间：
2010
期刊：
影响因子：
0
作者：
南純三朗;宮田茂;岡部昭延
通讯作者：
岡部昭延

High-level production and purification of clostripain expressed in a virulence-attenuated strain of Clostridium perfringens

产气荚膜梭菌毒力减弱菌株中表达的梭菌蛋白酶的高水平生产和纯化

DOI：
发表时间：
2011
期刊：
Protein Expression and Purification 76(1)
影响因子：
0
作者：
Hiroaki Tanaka;Hirofumi Nariya;Motoo Suzuki;Hitoshi Houchi;Eiji Tamai;Shigeru Miyata;Akinobu Okabe.
通讯作者：
Akinobu Okabe.