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ウエルシュ菌イプシロン毒素の作用するレセプターの同定と細胞障害機構の解明

鉴定产气荚膜梭菌ε毒素作用的受体并阐明细胞损伤机制

基本信息

批准号：
02J02787
负责人：
嶋本聖子
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kagawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

ウエルシュ菌イプシロン毒素(ET)は、MDCK細胞に対し細胞毒性を示す(CT50=100ng/ml)。これまでの結果からMDCK細胞は、ETの細胞膜への結合、ETの7量体(膜孔)形成、細胞膜の透過性の亢進、のプロセスを経て細胞死に至ると考えられる。しかしながらその詳細な分子メカニズムは不明である。ETのMDCK細胞に対する作用機構を検討するために耐性細胞を分離し、ET結合性を初めとするいくつかの性状について解析した。耐性細胞の耐性の形質は、10代継代後も保持されていた。この細胞の由来が、Heterogenous cloneとして存在していたのか、変異によるものかは不明である。ETの7量体形成は耐性細胞では見られず、7量体形成は細胞毒性と関係していることが確認された。35S標識のET前駆体毒素の結合実験を行ったところ、耐性細胞では毒素の結合が見られなかった。以上の結果から、耐性細胞はETに対する結合能の欠損により耐性を示すものと考えられた。一方、我々はこれまでに、MDCK細胞のラフト画分(1%Triton X-100耐性、蔗糖密度勾配低比重画分)に、ETの結合性が高いことを示している。そこで、両細胞の結合性の相違について検討するため、それぞれからラフト画分を調製し、SDS-PAGEにて両者の構成蛋白の比較を試みたところ、分子量約130kDa蛋白が野生型にのみ存在していた。よってこの130kDa蛋白の、レセプター蛋白としての可能性について現在検討中である。

The toxin (ET) was shown to be cytotoxic to MDCK cells (CT50 =100ng/ml). These results include MDCK cell turnover, ET membrane binding, ET 7 volume (membrane pore) formation, membrane permeability enhancement, and cell death.しかしながらその详细な分子メカニズムは不明である。The mechanism of action of MDCK cells in ET is discussed. The resistant cells are isolated. The characteristics of ET binding are analyzed. The tolerance character of the tolerant cells was changed and maintained after 10 generations. The origin of this cell, Heterogeneous clone and existence, Heterogeneous clone and unknown It has been confirmed that ET-7 molecule formation is not observed in resistant cells, and that ET-7 molecule formation is related to cytotoxicity. 35S identifies the binding of ET precursor toxins, and resistant cells. The above results show that there is a shortage of binding energy in the tolerant cells. On the other hand, we found that MDCK cells were resistant to 1% Triton X-100 and sucrose density was compatible with low specific gravity. ET binding was high. Comparison of protein components in SDS-PAGE and molecular weight of 130kDa protein with wild-type protein. The 130kDa protein is currently under investigation.