Comprehensive analysis of membrane protein interactions by using in vivo photo-cross-linking technology.

利用体内光交联技术全面分析膜蛋白相互作用。

• 批准号: 20770148
• 负责人: HINO Nobumasa
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20770148/
• 关键词: 蛋白質間相互作用; 膜タンパク質; クロスリンク; 拡張遺伝暗号; 非天然型アミノ酸; タンパク質問相互作用; GPCR; RAMP; 質量分析; プロテオミクス

To investigate the in vivo interaction between GPCRs and membrane proteins by a photo-cross-linking approach, a cross-linkable, non-natural amino acid was site-specifically incorporated at various positions of the extra-cellular domain of receptor-activity modified protein 1 (RAMP1) in mammalian cells. By exposing the cells to the light at 365 nm, the RAMP1 variants, each containing the non-natural amino acid at a specific site, were found to be efficiently cross-linked with the calcitonin receptor-like receptor, which is a GPCR known to interact with RAMP1. These variants were able to be cross-linked also with another GPCR, the calcitonin receptor. This observation revealed that RAMP1 binds to these different types of GPCRs directly, and the binding mode hardly changes, depending on the type of GPCR.

为了通过光交联方法研究GPCR与膜蛋白之间的体内相互作用，将交联的非天然氨基酸位点特异性地掺入哺乳动物细胞中受体活性修饰蛋白1（RAMP 1）的胞外结构域的各个位置。通过将细胞暴露于365 nm的光，发现每个在特定位点含有非天然氨基酸的RAMP1变体与降钙素受体样受体有效交联，降钙素受体样受体是已知与RAMP1相互作用的GPCR。这些变体也能够与另一种GPCR，降钙素受体交联。这一观察结果表明，RAMP1直接与这些不同类型的GPCR结合，并且结合模式几乎不改变，这取决于GPCR的类型。

项目成果

,タンパク質の特定のモチーフを介するタンパク質間相互作用の細胞内光クロスリンク法による網羅的解析

,利用细胞内光学交联方法全面分析特定蛋白质基序介导的蛋白质-蛋白质相互作用

• 发表时间: 2008
• 作者: Masaru YAGURA;Hiroyuki ARAKI;K. Shirahige;樋野 展正
• 通讯作者: 樋野 展正

タンパク質の特定のモチーフを介するタンパク質問相互作用の細胞内光クロスリンク法による網羅的解析

利用细胞内光学交联方法全面分析特定蛋白质基序介导的蛋白质-蛋白质相互作用

• 发表时间: 2008
• 作者: Ohye T;Inagaki H;Kogo H;Tsutsumi M;Kato T;Tong M;Macville MV;Medne L;Zackai EH;Emanuel BS;Kurahashi H;樋野展正
• 通讯作者: 樋野展正