Investigation of GPCRs interacting with RAMPs an functional analysis of their complex.

GPCR 与 RAMP 相互作用的研究及其复合物的功能分析。

• 批准号: 22570175
• 负责人: HINO Nobumasa
• 金额: $ 3.16万
• 依托单位: Osaka University (2012)The Institute of Physical and Chemical Research (2010-2011)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22570175/
• 关键词: タンパク質間相互作用; 膜タンパク質; 光クロスリンク; 非天然型アミノ酸; 質量分析; RAMP; GPCR; プロテオミクス; 非天然アミノ酸; クロスリンク; 拡張遺伝暗号; RAMP1; SILAC法

(I) I developed a system for the identification of proteins interacting with a given target protein, by site-specific incorporation of a photo-reactive amino acid into the target protein, in vivo photo-cross-linking to interacting proteins, and identification of thus captured proteins by comparative quantitative mass spectrometry analysis. A novel long chain photoreactive amino acid was alsosuccessfully incorporated into proteins, which enables wide-range photo-cross-linking of proteins.(II) I showed how RAMP and calcitonin receptor-like receptor interact with each other on the membrane of living cells by X-ray crystal structure analysis and site-specific photo-cross-linking assay.

(I)我开发了一种系统，用于鉴定与给定靶蛋白相互作用的蛋白质，方法是将光反应性氨基酸结合到靶蛋白中，在体内与相互作用的蛋白质进行光交联，并通过比较定量质谱分析鉴定由此捕获的蛋白质。一种新型的长链光反应氨基酸也被成功地结合到蛋白质中，从而实现了蛋白质的大范围光交联。（II）通过x射线晶体结构分析和位点特异性光交联实验，展示了RAMP和降钙素受体样受体在活细胞膜上如何相互作用。

项目成果

Genetic Incorporation of a Photo-Crosslinkable Amino Acid Reveals Novel Protein Complexes with GRB2 in Mammalian Cells

• DOI: 10.1016/j.jmb.2010.12.022
• 发表时间: 2011-02-18
• 期刊: JOURNAL OF MOLECULAR BIOLOGY
• 影响因子: 5.6
• 作者: Hino, Nobumasa;Oyama, Masaaki;Sakamoto, Kensaku
• 通讯作者: Sakamoto, Kensaku

Crystal structure of bacterial RNA polymerase bound with a transcription inhibitor protein

• DOI: 10.1038/nature09573
• 发表时间: 2010-12-16
• 期刊: NATURE
• 影响因子: 64.8
• 作者: Tagami, Shunsuke;Sekine, Shun-ichi;Yokoyama, Shigeyuki
• 通讯作者: Yokoyama, Shigeyuki

Crystallographic study of a site-specifically cross-linked protein complex with a genetically incorporated photoreactive amino acid.

• DOI: 10.1021/bi1016183
• 发表时间: 2011-01
• 期刊: Biochemistry
• 影响因子: 2.9
• 作者: Shin Sato;S. Mimasu;A. Sato;Nobumasa Hino;K. Sakamoto;T. Umehara;S. Yokoyama

インターロイキン-5受容体α鎖による2量体インターロイキン-5認識の構造的基盤

IL-5受体α链识别二聚IL-5的结构基础

• 发表时间: 2012
• 作者: 田上俊輔;関根俊一;Thirumananseri Kumarevel;樋野展正;村山祐子;亀ヶ盛俊介;山本雅貴;坂本健作;横山茂之;草野清輔,新野睦子,樋野展正,大沢登,生谷尚士,高木智,坂本健作,横山三紀,白水美香子,高津聖志,横山茂之
• 通讯作者: 草野清輔,新野睦子,樋野展正,大沢登,生谷尚士,高木智,坂本健作,横山三紀,白水美香子,高津聖志,横山茂之

新たなクロスリンカー含有非天然型アミノ酸のタンパク質への部位特異的導入と,その広域性光クロスリンク能

将一种新的含交联剂的非天然氨基酸定点引入蛋白质及其广谱光交联能力

• 发表时间: 2012
• 作者: 柳沢達男;樋野展正;伊良波史枝;向井崇人;坂本健作;横山茂之
• 通讯作者: 横山茂之