Proteolipid of vacuolar H+-ATPase of Plasmodium falciparum

恶性疟原虫液泡H-ATP酶的蛋白脂质

• 批准号: 20790094
• 负责人: YATSUSHIRO Shouki
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20790094/
• 关键词: 感染症; マラリア原虫; 薬学; マラリア

本研究課題は「熱帯熱マラリア原虫における膜輸送蛋白質の同定と機能解析」と題し、特にヒト・マラリア原虫(Plasmodium falciparum)の赤血球内寄生時における原虫外膜系の形成機構と血球膜へのタンパク輸送機構を分子(蛋白質)レベルで解明することを目的として研究を遂行してきた。平成20年度はその中でも特にこれまで明らかにしているN-ethylmaleimide-sensitive factorのマラリアホモログ(Pf NSF)が原を足がかりにいくつかの原虫由来の膜融合装置関連蛋白質について同定することを目指した。昆虫細胞を用いた強制発現系を用いてマラリアNSF(Pf NSF)を大量に発現させ、特異的抗体を駆使し膜融合装置関連蛋白質の候補を選び出した。これらの蛋白質の同定、生化学的、構造生物学的解析を行っていくことを考えている。さらに、赤血球内に寄生維持するマラリア原虫をこれら小胞輸送系を用いて簡便に検出できないかと考え、血中の特定蛋白質(バイオマーカー候補)の検出を念頭におき、簡便なバイオマーカー検出系の確立を試みた。その結果、極微量の全血をから血中のアミラーゼ活性を測定する方法を確立するにいたった(Maeda et al. 2008 Electrophoresis)。平成21年度は昨年度より解析を進めているN-ethylmaleimide-sensitive factorのマラリアホモログ(Pf NSF)が原を足がかりに昆虫細胞を用いた強制発現系と特異的抗体を用いていくつかの原虫由来の膜融合装置関連蛋白質についていくつか候補タンパク質を見いだした(sec23ホモローグ等)。これらが本当に原虫とヒトの種の間の行き来に関与するのか?またその小胞輸送をコントロールしているのか?さらに今後はこれらの蛋白質の遺伝子とGFPを融合した遺伝子をマラリアに発現させる系を構築し、蛍光顕微鏡下で可視化する。合わせてマラリアに特定のプラスミ遺伝子を発現するプラスミドを把持したものを簡便に検出できないかと考え、プラスミドへのライゲーションをマイクロチップ電位泳動装置を用いて確認する方法を確立した(Umemoto et al. 2010 JPharm Biomed Anal.)。今後これらの原理を応用しつつ特定の遺伝子(プラスミド)を保持したマラリア原虫の検出を行いたい。

This research topic は "帯 hot マ ラ リ ア parasite に お け る の membrane transport proteins with と function resolution" と topic し, に ヒ ト · マ ラ リ ア parasite, Plasmodium Parasitic falciparum) の red blood cell when に お け る parasite membrane department の form institutions と blood cell membrane へ の タ ン パ ク transportation agency を molecules (proteins) レ ベ ル で interpret す る こ と を purpose と し を て research carries out し て き た. In 20 year pp.47-53 は そ の で も, に こ れ ま で Ming ら か に し て い る N - ethylmaleimide - sensitive factor の マ ラ リ ア ホ モ ロ グ (NSF) Pf が original を foot が か り に い く つ か の parasite origin の masato even protein membrane fusion device に つ い て be す る こ と を refers し た. Insect cell を with い た 発 is now compulsory を with い て マ ラ リ ア NSF (NSF) Pf を large に 発 now さ せ, specific antibodies を 駆 make し masato even protein membrane fusion device の alternate を び from し た. The analysis of <s:1> れら <s:1> protein <e:1>, biochemistry and structural biology を line って く く とを とを tests えて る る. さ ら に, red blood cell inside に parasitic maintain す る マ ラ リ ア parasite を こ れ ら を with vesicular transport department い て simple に 検 out で き な い か と え test, blood の specific protein (バ イ オ マ ー カ ー alternate) の 検 out を thought に お き, simple な バ イ オ マ ー カ ー 検 try out is の established を み た. そ の results, extremely trace の whole blood を か ら blood の ア ミ ラ ー ゼ determination of active を す を る method established す る に い た っ た (Maeda et al. 2008 Electrophoresis). Analytical を pp.47-53 21 year は yesterday year よ り into め て い る N - ethylmaleimide - sensitive factor の マ ラ リ ア ホ モ ロ グ (Pf NSF) が original を foot が か り に insect cell を with い た 発 is now compulsory を と specific antibody with い て い く つ か の parasite origin の masato even protein membrane fusion device に つ い て い く つ か alternate タ ン パ ク qualitative を see い だ し た (sec23 ホ モ ロ ー グ, etc.). Is there a れらが に relationship between に protozoa とヒト <s:1> species <e:1> and する <s:1> に に? Youdaoplaceholder0 またそ またそ small cell delivery をコ トロ トロ トロ <s:1> <s:1> て て て る る る て? さ ら に future は こ れ ら の の but 伝 protein sequence と GFP fusion を し た posthumous son 伝 を マ ラ リ ア に 発 now さ せ る を build し, 蛍 optical 顕 microscopically で visualization す る. Close わ せ て マ ラ リ ア に specific の プ ラ ス ミ heritage 伝 son を 発 now す る プ ラ ス ミ ド を holding し た も の を simple に 検 out で き な い か と え test, プ ラ ス ミ ド へ の ラ イ ゲ ー シ ョ ン を マ イ ク ロ チ ッ プ potential swimming device を with い て confirm す を る method established し た (Umemoto et al. 2010 JPharm Biomed Anal. The future こ れ ら の principle を 応 with し つ つ specific の heritage 伝 child (プ ラ ス ミ ド) を keep し た マ ラ リ ア parasite の 検 を row い た い.

项目成果

細胞検出法及び該方法に用いるマイクロアレイチップ

细胞检测方法及该方法中使用的微阵列芯片

• 发表时间: 2009

抗原抗体反応を利用した標的物質検出用流路チップ

利用抗原抗体反应检测目标物质的通道芯片

• 发表时间: 2008

感染症における感染血液細胞の検出法

检测传染病中感染的血细胞的方法

• 发表时间: 2008

熱帯熱マラリア迅速検出のための細胞チップシステムの開発

恶性疟疾快速检测细胞芯片系统的研制

• 发表时间: 2009
• 作者: 八代聖基;山村昌平;山口裕加;堀井俊宏;片岡正俊
• 通讯作者: 片岡正俊

熱帯熱マラリアの細胞チップを用いた迅速検出系の構築

恶性疟细胞芯片快速检测系统的构建

• 发表时间: 2008
• 作者: 八代聖基;山村昌平;片岡正俊
• 通讯作者: 片岡正俊