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植物における尿素の輸送と体内利用

尿素在工厂内的运输和内部利用

基本信息

批准号：
20880004
负责人：
小島創一
金额：
$ 1.87万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

シロイヌナズナ尿素輸送担体(AtDUR3)の部位特異的変異が酵母DUR3欠損変異株(dur3)の生育に及ぼす影響を調査した。部位特異的変異は、Y566とS568について、脱リン酸化をミミックするA(アラニン)とリン酸化をミミックするD(アスパラギン酸)について検討した。Y556Dは、野生型AtDUR3に比べて生育が良くなり、S568Dでは、生育が悪くなった。リン酸化部位アミノ酸を両方ともAspに置換させたY566D S568Dでは、若干生育が良くなっているように観察された。また、リン酸化部位アミノ酸をALAに置換された変異AtDUR3であるY566A、S568A、Y566A S568Aでは、野生型AtDUR3に比べて、あまり生育差が見られなかった。このように、AtDUR3のリン酸化部位アミノ酸をASPに置換させた酵母では、野生型AtDUR3の酵母に比べて、生育差が生じ、ALAに置換させた酵母では、あまり生育差が生じないことが確認された。このことから、AtDUR3にリン酸化を模倣するような部位特異的変異を起こすことで、AtDUR3がリン酸化による翻訳後制御を受け、その輸送能が変化したという可能性が示唆された。pSPORT-P上に構築されたライブラリーをAatIIとClaIとNaeIとNheIとPvuIで消化し、pDONR221に変換したライブラリーを獲得した。スプリットユビキチンに用いるベクター系について、Gateway反応を利用した変換系を適用できるように改変し、スプリットユビキチンを利用したスクリーニングの準備が完了した。イネのDUR3遺伝子のcDNAとプロモーター領域のクローニングに取り組んだが、機能検証には至らなかった。

To investigate the effects of site-specific variation on the growth and development of yeast dur 3 mutants. site-specific variation, Y566 and S568, deacidification, deacidification. Y556D, wild-type AtDUR3, S568D The acid content of the product is determined by the amount of the product. Y566A, S568A, Y566A, S568A, wild-type AtDUR3 are different from each other in terms of fertility. This is the first time that we have seen this phenomenon. Atdur 3 is a site-specific inhibitor of the enzyme. pSPORT-P upper structure: AatII, ClaiI, NheI, PvuI, pDONR221 For example, if you want to change the name of the website, you can change it. The cDNA of DUR3 gene is selected from the group of genes in the field, and the functional model is selected from the group of genes in the field.