ユビキチン様分子ISG15による翻訳制御の解明

阐明泛素样分子 ISG15 的翻译控制

• 批准号: 20890004
• 负责人: 奥村 文彦
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20890004/
• 关键词: 国際情報交換; アメリカ; ISG15; キャップ構造; タンパク質翻訳; 4EHP; ユビキチン様分子; インターフェロン

1、4EHP-ISG15融合タンパク質による特異的結合mRNAの同定脱ISG15酵素(基質分子よりISG15を取り除く酵素)であるUBP43のタンパク質発現を低下させた慢性骨髄性白血病(CML)細胞株KT-1細胞を用いた。この細胞株はインターフェロン刺激依存的な強いISG15修飾活性を示す。メッセンジャーRNAのキャップ構造結合分子である4EHPあるいはそのISG15修飾を模した4EHP-ISG15融合タンパク質を安定に発現するKT-1細胞株をレトロウイルス感染により樹立した。4EHP、4EHP-ISG15融合タンパク質を細胞溶解物より精製し、共精製されるメッセンジャーRNAをフェノール・クロロホルム抽出により得た。得られたメッセンジャーRNAは微量であるためPCRにより増幅した。増幅産物をビオチンで標識し、GeneChip Human Genome U133A 2.0 Array(Affymetrix)を用いたマイクロアレイにより解析した。その結果、4EHPが特異的に結合するメッセンジャーRNAとして少なくとも3つの候補分子を得た。現在その結果を裏付けるために4EHPあるいは4EHP-ISG15と共に精製されるメッセンジャーRNAを鋳型として、候補分子特異的なプライマーを用いたPCRを行い、特に4EHP-ISG15に優位に結合しているかを確認中である。2、4EHP-ISG15融合タンパク質結合mRNAの分子生物学的解析候補分子に対する抗体が市販されていたので4EHP-ISG15融合分子によりそれらのタンパク質分子が翻訳制御を受けているか検討中である。

1。通过4EHP-ISG15融合蛋白鉴定特异性结合mRNA。使用KT-1细胞，从而降低了ISG15酶（一种从底物分子中去除ISG15的酶）的Ubp43的蛋白表达。该细胞系表现出依赖干扰素刺激的强大ISG15修饰活性。通过逆转录病毒感染建立了稳定表达4EHP的KT-1细胞系（稳定表达4EHP），它是信使RNA的胶囊结合分子或4EHP-ISG15融合蛋白，模仿其ISG15修饰。从细胞裂解物中纯化4EHP和4EHP-ISG15融合蛋白，并通过提取苯酚 - 氯仿，从而获得共纯化的Messenger RNA。获得的Messenger RNA通过PCR扩增，因为它少量。使用Genechip人类基因组U133A 2.0阵列（Affymetrix）将扩增产物用生物素标记，并通过微阵列进行分析。结果，至少获得了三个候选分子作为特定结合4EHP的信使RNA。为了支持这一结果，目前正在使用使用4EHP或4EHP-ISG15纯化的Messenger RNA作为模板进行PCR进行PCR，以确认结合是否特别与4EHP-ISG15结合。 2。用于4EHP-ISG15融合蛋白结合mRNA的分子生物学分析的抗体已商业上可用，因此目前正在研究这些蛋白质分子是否受到4EHP-ISG15融合分子的翻译控制。

项目成果

メッセンジャーRNAキャップ構造結合分子eIF4E1ホモログ4EHPはユビキチン様分子ISG15修飾によりキャップ構造結合活性が増強される

信使RNA帽结构结合分子eIF4E1同源物4EHP通过泛素样分子ISG15的修饰增强了帽结构结合活性

• 发表时间: 2008
• 作者: 畠山浩人;Diky Mudhakir;秋田英万;原島秀吉.;奥村文彦
• 通讯作者: 奥村文彦

生化学

生物化学

• 发表时间: 2007
• 作者: 前田礼男;穂積俊矢;谷口喜一郎;奥村高志;松野健治
• 通讯作者: 松野健治

ユビキチン様分子ISG15依存性翻訳制御による免疫制御の解明

阐明泛素样分子 ISG15 依赖的翻译控制对免疫调节的作用

• 发表时间: 2008
• 作者: 畠山浩人;秋田英万;小暮健太朗;原島秀吉;奥村文彦
• 通讯作者: 奥村文彦