動原体の核内配置機構とその役割の解明

阐明着丝粒的核排列机制及其作用

• 批准号: 20657002
• 负责人: 五島 剛太
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
• 财政年份: 2008
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2008 至 2009
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20657002/
• 关键词: 細胞、組織; 核酸

本研究では、RNAi、自動顕微鏡撮影、自動画像解析、コンピュータシミュレーションを組み合わせ、培養細胞で動原体が核内中央付近に配置する分子機構を明らかにし、さらにその配置の意義を、特に分裂期における微小管との結合効率といった観点から追究することを計画した。前年度までの細胞生物学的実験およびシミュレーションにより、ショウジョウバエ培養細胞において動原体が核中央付近にクラスター化していることを見出したが、このクラスター化の度合いと分裂期における微小管との結合効率に正の相関は認められなかった。平成21年度は、本計画のもうひとつの目標である自動画像解析と顕微鏡観察の自動化について研究を進めた。我々は、地元ガラス会社等の協力を得て、敷居を取り除いて96細胞サンプルを貼付けることのできる巨大なプレパラートを作成した。このプレパラートを用いると、対物レンズがサンプル間を移動する際に自動焦点装置が作用し続けることができ、複数サンプルの自動イメージングが可能となった(通常の96穴プレートでは、サンプル間にあるプラスチックの敷居が自動焦点装置の作用を中断させてしまう)。本システムを用いて、ショウジョウバエS2細胞の12サンプルについて、スピニングディスク型共焦点顕微鏡、100倍油浸レンズを用いて300の2色画像をわずか15分でイメージングすることに成功した。また、顕微鏡で撮影した核シグナルを目動認識しシグナル強度を測定するコシピュタープログラムも作製した。以上の成果は、自前の顕微鏡を用いた自動イメージング、自動画像解析を可能とするテクノロジーの基盤となる。

本研究从RNA干扰、RNA干扰、自噬微影、自噬图像解析、荧光显微镜下观察、荧光原位杂交等方法进行了细胞核内基质的原位杂交，细胞核内基质的原位杂交等方法进行了研究。前年度までの細胞生物学的実験およびシミュレーションにより、ショウジョウバエ培養細胞において動原体が核中央付近にクラスター化していることを見出したが、このクラスター化の度合いと分裂期における微小管との結合効率に正の相関は認められなかった。平成21年度は、本計画のもうひとつの目標である自動画像解析と顕微鏡観察の自動化について研究を進めた。我々は、地元ガラス会社等の協力を得て、敷居を取り除いて96細胞サンプルを貼付けることのできる巨大なプレパラートを作成した。无菌过滤器使用过滤器，物质过滤器移动过滤器自吸点装置过滤作用过滤器，数量过滤器自吸点装置过滤器可能过滤器（通常为96个过滤器，过滤器自吸点装置过滤作用过滤器）。本试验采用标准品、标准品S2细胞株12个细胞株标准品、标准品型共聚焦点微球、100倍油标、标准品300个2色像标、15分荧光粉、标准品等。また、顕微鏡で撮影した核シグナルを目動認識しシグナル強度を測定するコシピュタープログラムも作製した。以上の成果は、自前の顕微鏡を用いた自動イメージング、自動画像解析を可能とするテクノロジーの基盤となる。

项目成果

Microtubule generation within the spindle

纺锤体内微管的产生

• 发表时间: 2009
• 作者: R Uehara;G Goshima;五島剛太;Gohta Goshima
• 通讯作者: Gohta Goshima

Genome-Wide RNAi Screen Identifies Genes Required for Mitotic Spindle Formation in Animal Cells

全基因组 RNAi 筛选鉴定动物细胞有丝分裂纺锤体形成所需的基因

• 发表时间: 2009
• 作者: R Uehara;G Goshima;五島剛太;Gohta Goshima;Gohta Goshima
• 通讯作者: Gohta Goshima

ハイスループット全自動顕微鏡を用いた全ゲノムRNAiスクリーニング

使用高通量全自动显微镜进行全基因组 RNAi 筛选

• 发表时间: 2008
• 作者: R Uehara;G Goshima;五島剛太;Gohta Goshima;Gohta Goshima;五島剛太;五島剛太;五島剛太;五島剛太
• 通讯作者: 五島剛太

New look inside the spindle: microtubule-dependent microtubule generation within the spindle

• DOI: 10.1016/j.ceb.2009.11.012
• 发表时间: 2010-02-01
• 期刊: CURRENT OPINION IN CELL BIOLOGY
• 影响因子: 7.5
• 作者: Goshima, Gohta;Kimura, Akatsuki
• 通讯作者: Kimura, Akatsuki

Functional genoraic screen reveals genes involved in lipid droplet formation and utilization.

功能基因组筛选揭示了参与脂滴形成和利用的基因。

• 发表时间: 2008
• 期刊: Nature 9 ; 453 (7195)
• 作者: Guo Y;Walther TC;Rao M;Stuurman N;Goshima G;Terayama K;Wong JS;Vale RD;Walter P;Farese Jr RV.
• 通讯作者: Farese Jr RV.