植物細胞の運命を決める位置情報伝達経路の解明

阐明决定植物细胞命运的位置信息传递途径

基本信息

批准号：
20657012
负责人：
高田忍
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20657012/
关键词：
植物胚発生位置情報転写因子

项目摘要

研究代表者は本研究課題で、シロイヌナズナの位置依存的な遺伝子発現を決める転写因子を同定する新しい手法の開発を目指した。1.昨年度までに転写因子クローンのみを含むone-hybrid用ライブラリーを開発し、ATML1の表皮特異的な発現に十分なシス配列に結合する転写因子をスクリーニングした。結合が予測されていた転写因子が多数得られたことから、この手法が有効であることが示された。今年度は共同研究者との共著で論文を公表した。また、新しく単離された転写因子のうち、コンセンサス結合配列がATML1プロモーターに見つかったものについては、そのシス配列に変異を導入する実験をおこなった。これらの変異による発現パターンの顕著な変化は観察されなかったが、これはATML1の発現が多くの転写因子によって独立に制御されていることが一因と考えている。今後はChIP解析によって植物内での相互作用を確認していく予定である。2.ATML1のシス配列に存在する転写因子複合体を生化学的に精製するための実験も進めた。ATML1のシス配列とレポーター遺伝子(GFP)を含むレプリコンベクターを、Rep遺伝子を持つ系統に形質転換し、GFPの発現が見られるものを選抜した。しかしながら、エタノール誘導系によるRepの誘導は発現制御が難しいことが分かったため、エストラジール誘導性の発現ベクターを利用して再度形質転換体を選抜中である。引き続き系の改良とタンパク精製の予備実験を進めて行く予定である。3.組織特異的な転写活性化能を持つ転写因子をスクリーニングする系の開発も進めた。今年度は二成分による発現制御システムを改良し、形質転換体を得た。現在のところ、GFPとRFPの二種類のレポーターを使うことで、転写因子の発現する場所と機能する場所を同時に可視化できることが確認できた。今後は多くの転写因子を用いて網羅的なスクリーニングを進めていきたい。

在本研究主题中，主要研究者旨在开发一种新方法来识别确定拟拟南芥中位置依赖基因表达的转录因子。 1。到去年，开发了一个仅包含转录因子克隆的单杂交的库，并筛选了与足以与ATML1表皮特异性表达相结合的转录因子。该技术被证明是有效的，因为预测被预测的许多转录因子。今年，我与合作者共同发表了一篇论文。此外，对于新分离的转录因子，在ATML1启动子中发现了共有的结合序列，进行了一个实验，将突变引入顺式序列。由于这些突变引起的表达模式没有显着变化，部分原因是ATML1表达受许多转录因子独立调节。将来，我们计划通过CHIP分析确认植物内部的相互作用。 2。还进行了实验以在ATML1的顺式序列中纯化生化纯化的转录因子复合物。含有ATML1的顺式序列和报告基因（GFP）的复制子向量转化为带有REP基因的线，并选择了具有GFP表达的线。但是，由于已经发现表达控制很难通过乙醇诱导系统来控制REP的表达，因此使用雌激素诱导的表达载体再次选择转化子。我们计划继续进行系统改进和蛋白质纯化的初步实验。 3。我们还开发了一个系统来筛选具有组织特异性转录激活能力的转录因子。今年，我们改进了两部分表达控制系统，以获得转化体。当前，已经证实，使用两种类型的记者GFP和RFP，可以可视化表达转录因子并运行的位置。将来，我们希望使用许多转录因子进行全面的筛查。