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蛋白質の可視化とプロテオーム解析による複製後修復の分子メカニズムの解明

通过蛋白质可视化和蛋白质组分析阐明复制后修复的分子机制

基本信息

批准号：
20710041
负责人：
中嶋敏
金额：
$ 2.83万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20710041/
关键词：
遺伝子プロテオームゲノム安定性 DNA修復

项目摘要

ゲノム上に生じた一部の損傷は修復しきれずに複製期まで残り、DNA複製の進行を頻繁に阻害する。進行が阻害された複製フォークは細胞死を誘発するのみならず、DNAの二本鎖切断等の二次的損傷を引き起こし、ゲノム不安定性や発ガンの原因となる。この時損傷の除去を伴わず複製を再開させる機構が複製後修復(損傷トレランス)で、複製後修復は複数の損傷乗り越えポリメラーゼによってなされる損傷乗り越え複製と、メカニズムはほとんどわかっていないが新生鎖を鋳型にするテンプレートスイッチングの二つの経路からなる。RAD18は複製後修復で中心的な役割を果たし、この二つの経路の制御に関わっていると考えられているが、その詳しいメカニズムはわかっていない。この重要な問題を明らかにする為に、RAD18とテンプレートスイッチングの経路でユビキチン転移酵素(E2)として働くUbc13/Mms2複合体のプロテオーム解析を試みた。免疫沈降によりそれそれの蛋白質の結合蛋白質を精製し、nanoLC-MS/MSにより蛋白質を同定した結果、RAD18は特異的にHSP70と結合する事がわかり、IUD18とHSP70の結合の複製後修復における役割を、in situ解析やin vitroでの機能解析により解析を行った。またUbc13とMms2の免疫沈降で精製した蛋白質からは、複数のユビキチン結合酵素(E3)を含む、今までUbc13とMms2に結合する事が知られていない蛋白質を同定され、これらの蛋白質が複製後修復で栗たす役割を解析した。また、共同研究によって明らかにした機能的な相互作用より、ワーナー症候群の原因遺伝子であるWRNとRAD18が直接相互作用する事を発見し、この結合の細胞内での意義を解析した。(731字)

In the last part of the experiment, you will need to repair the residue during the replication period and the DNA copy to prevent the damage. Carry out secondary prevention, such as the prevention of cell death, the cut-off of DNA ordinary universities, and so on, to determine the cause of the disease. If you do not copy the machine after you open it, then modify it. After the copy, you can change the number of copies. After that, you can change the number of copies. Please do not change the number of copies. In the RAD18 copy post-repair center, the service cut the fruit, the system of the road, the system of the road, and the system of the system. This is an important question. Please tell me how to do this. RAD18. Please do not know how to transfer enzyme (E2). This is the most important problem. You need to analyze the Ubc13/Mms2 complex. The results of protein binding assay, protein binding assay, nanoLC-MS/MS protein binding assay, HSP70 protein binding assay, HSP70 binding assay, IUD18 HSP70 binding assay, in situ analysis and in vitro assay were used to analyze the results. Ubc13, Mms2, immunoprecipitation, protein, E3, E3 The purpose of this study is to understand the interaction mechanism of WRN syndrome, the cause of the syndrome, the direct interaction and the analysis of the meaning of the intracellular hormone. (731 words)