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3β-HSD欠損症に特有な多重抱合型胆汁酸異常代謝物の構造決定と臨床診断法の確立

确定3β-HSD缺乏症特异性异常多结合胆汁酸代谢物的结构并建立临床诊断方法

基本信息

批准号：
20750141
负责人：
柿山玄太
金额：
$ 2.25万
依托单位：
Nihon University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

先ず、患者尿の予備的LC-MS分析の結果から、-連の"異常胆汁酸多重抱合体"は、3β, 7β-dihydroxy-5-cholenoic acidの3-硫酸, 7-Nーアセチルグルコサミン, 24-グリシン(あるいはタウリン)抱合体を基本とし、これに水酸基やオキソ基が付加したもの数種が存在することが予測された。先ず、本化合物群の合成に取り掛かることとした。目的とする多重抱合体はいずれも3β,7β-dihydroxy-Δ^5構造を有し、互いに構造が酷似する。このような代謝物相互の高効率合成には原料ステロイドへの位置、並びに立体選択的な水酸基の導入法の確立がポイントとなるものと考えられた。そこで、同じ3β-hydroxy-Δ^5構造を有するコレステロールを用いて、ジオキシラン類による一段階遠隔水酸化反応法について検討を加えた。その結果、ethyl(trifiuoromethyl)dioxiraneを反応系中でin siru発生させると、最も簡便かつ高効率にコレスタン側鎖のC-25位を直接酸化できることを見出した。さらに、得られた25-ヒドロキシコレステロールから、種々の生体内オキシステロール類(24-ヒドロキシコレステロール, 24-オキソコレステロール等)へ短段階で導くルートも併せて開拓した。ここで得られた知見を基に、次いで33-hydroxy-Δ^5胆汁酸を原料として一連の胆汁酸多重抱合体の標品合成を行なった。また、LC-ESI/MS法で生体試料中の微量物質を高精度に定量するには、適切な内部標準化合物(IS)が必須となる。そこで、IS候補化合物数種を分子設計して化学合成を行ない、これを用いてELSD-HPLCによる目的多重抱合体のプレリミナリーな分析条件を検討した。その結果、3β-sulfooxy-7β-hydroxy-24-nor-5β-cholanoic acidをISとして用いるとき至適分析条件が確立できることが判明した。現在、LC-ESI/MSにて分析メソッドのバリデーションを行うと共に、生体試料から標的多重抱合体の効率的な抽出条件にも検討を加えている最中である。

First, the results of the LC-MS analysis of the patient's urine were prepared, including the "abnormal bile acid multiple complex", 3β, 7β-dihydroxy-5-cholenoic acid, 3-sulfuric acid, 7-Nーアセチルグルコサミン, 24-Surface There are several kinds of acid-based やオキソbased がしたものがすることがされた. First of all, the synthesis of this compound group is done by taking the かることとした. The purpose of the multi-clathrate complex is to have a 3β,7β-dihydroxy-Δ^5 structure, and a mutual structure that is very similar to する. The high-efficiency synthesis of metabolite interactions and the location and combination of raw materials The method of introduction of aqueous acidic groups in stereoselectivity was established by がポイントとなるものと科えられた. It has the same structure as 3β-hydroxy-Δ^5 and is used in するコレステロールをいて, ジオキシラン-type による one-stage remote water acidification reaction method について検椒加えた.そのRESULT、ethyl(trifiuoromethyl)dioxiraneをreaction systemでin siru 発生させると, the simplest and most efficient にコレスタン side lock のC-25 position を direct acidification できることを见出した.さらに、得られた25-ヒドロキシコレステロールから、kind of 々のIn vivo オキシステロール type (24-ヒドロキシコレステロール, 24-オキソコレステロール, etc.), short-stage guide, and opener.ここで得られた知见をbasedに、subいで33-hydroxy-Δ^5 bile acid をraw material として一连のbiliary acid multiple complexes and the standard product synthesis を行なった. Therefore, the LC-ESI/MS method requires high-precision quantification of trace substances in biological samples and appropriate internal standard compounds (IS). Molecular design and chemical synthesis of several IS candidate compounds, そこで, and これを use いてE LSD-HPLC analysis conditions for multiple complex complexes were analyzed. As a result, 3β-sulfooxy-7β-hydroxy-24-nor-5β-cholanoic acid was used to determine the appropriate analysis conditions. Now, LC-ESI/MS analysis of メソッドのバリデーションを行うとKOに, production The extraction conditions for the efficiency of the multi-cohesion body of the body sample are as follows: