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エピガロカテキンガレートによる腎虚血再潅流障害および急性腎拒絶反応の制御

表没食子儿茶素没食子酸酯控制肾缺血再灌注损伤和急性肾排斥

基本信息

批准号：
20890119
负责人：
奥見雅由
金额：
$ 1.97万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

目的1)ラット腎虚血再灌流障害(IRI)モデルおよび目的2)ラット同種腎移植拒絶反応モデルの作成を行った。1)SDラット(雄性、8〜12週齢)を用い、両側腎動脈を60分間遮断した後に再灌流させる腎IRIモデル(n=6)を作成した。血清クレアチニン(sCre)値は、0.22±0.05、2.42±1.21、0.82±0.67mg/dl(前、24、72時間後)とこれまで我々が報告してきた結果が再現されていた。さらに、エピガロカテキンガレート(EGCG)の抗酸化作用の漂的として、活性酸素種(ROS)によるDNA酸化産物である尿中8-OHdGの変化を検討した。尿中8-OHdG量をELIZA法にて測定し、IRIによる組織障害後の生成速度を評価した結果、22.4±8.3から39.2±5.8ng/kg/hr(24、72時間後)に増加していることを確認した。2)WFラットをドナー、LEWラットをレシピエント(雄性、8〜12週齢)とした同種腎移植急性拒絶反応モデルの作成を試みた。コントロール群として10頭作成し、その内6頭を移植後8〜10日目に屠殺、移植腎組織を採材した。H&E染色では糸球体や間質への単核球浸潤を認めたが、屠殺時点でのsCre値は0.75±0.24mg/dlであった。残り4頭は生存期間の検討のため経過観察したが、全例2カ月以上生存した。EGCG投与による免疫抑制効果を検討するにあたり、この組合せでの腎移植モデルは不適切と判断した。そこで.ドナーをBNラットに変更予定であるが、移植実験前にLEWラットとBNラットの脾臓細胞によるリンパ球混合反応(MLR)にてそのMHCの相違を評価した。同時にEGCG添加によるMLRの抑制効果を検討した。Stimulation lndex(SI)は、LEW@BN=3.5と十分な反応を示し、EGCG添加濃度依存性に1.75、1.10、1.05(EGCG添加量25、50、100μM)と抑制さていることを確認した。

Objective 1) To study the effect of IRI on renal allograft rejection. 1)SD rats (male, 8 ~ 12 weeks old) were treated with 60 minutes of reperfusion in the middle and right renal arteries (n=6). Serum sCre values were 0.22±0.05, 2.42±1.21 and 0.82± 0.67 mg/dl(before, 24 and 72 hours). The anti-acidification effect of EGCG and ROS on DNA acidification products in urine were investigated. 8-OHdG in urine was determined by ELIZA method, and the production rate after IRI was evaluated. The results showed that the 8-OHdG content increased from 22.4±8.3 ng/kg/hr to 39.2± 5.8 ng/kg/hr(after 24 and 72 hours). 2)WF, LEW, LEW 10 of them were prepared and 6 of them were slaughtered 8 to 10 days after transplantation. H&E staining was used to determine the sCre value at the time point of slaughter, 0.75±0.24mg/dl. The remaining 4 heads were examined during the survival period, and the whole case survived for more than 2 months. EGCG administration and immunosuppressive effects are not appropriate for kidney transplantation.そこで. Before transplantation, LEW and BN were evaluated for MHC incompatibility. At the same time, EGCG is added to MLR and its inhibition effect is discussed. Stimulation lndex(SI) was confirmed by LEW@BN=3.5 and EGCG addition concentration-dependences of 1.75, 1.10 and 1.05(EGCG addition amounts of 25, 50 and 100μM).