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神経細胞樹状突起スパインの形態変化におけるTLS関連mRNP顆粒の機能解析

TLS相关mRNP颗粒在神经元树突棘形态变化中的功能分析

基本信息

批准号：
20890283
负责人：
崔虎星
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Osaka Bioscience Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (Start-up)
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-20890283/
关键词：
神経科学樹状突起スパイン分子生物学遺伝子タンパク質

项目摘要

近年、ニューロンの樹状突起スパイン形態変化における局所輸送と翻訳機構が注目を浴びている。例えば、重度な精神遅滞を伴う脆弱X症候群ではスパインの形態異常が報告されているが、その原因遺伝子であるFMRPから作られるタンパクが大きなmessenger riboneucleoprotein(mRNP)顆粒の一部として、ニューロンにおけるmRNAの局所輸送と翻訳に関与していることが明らかにされている。当研究室では、TLS依存性mRNPがMyo5aモータータンパクによってスパインへ運ばれ、スパインの形態変化に重要な役割を果たすことを見出した。本研究では、このMyo5aのカーゴ結合Globular-tailドメインと相互作用する他の分子を同定し、さらにその分子のスパイン形態変化における役割を明らかにすることを目的とした。Myo5aと相互作用する分子を同定するための手法として、まずGlobular-tailドメインをベイトにYeast Two Hybrid法を用いたスクリーニングを行った。その結果、複数の分子が候補として同定されており、さらにこれらの分子の脳における発現分布を調べることでターゲットを絞った。次に、絞られた候補分子についてBiomolecular Fluorescence Complementation(BiFC)法を用いて、実際生きた哺乳類細胞での分子間相互作用の可視化を試みた。BiFC法では、蛍光タンパク質のN断片をMyo5aに、C断片を候補分子にそれぞれ連結し、培養細胞に共導入することで、もし候補分子との相互作用があれば蛍光タンパク断片の再結合により蛍光が観察されるはずである。四つの候補分子で調べたところ、Trappc6Bという候補分子で比較的に強い蛍光が観察された。この分子はER-Golgi輸送に関わることが報告されているが、今後樹状突起スパインの形態における機能分析が期待される。

In recent years, the morphology of dendrites has changed, and the transport mechanism has changed. For example, severe mental retardation is associated with fragile X syndrome, and morphological abnormalities of the messenger ribonucleoprotein (mRNP) particles are reported. When the study room is open, TLS dependency on mRNP is revealed. The purpose of this study is to identify the molecular structure of Myo5a and its interaction with Globular-tail molecules. Myo-5a interaction, molecular identity, Globular-tail, Yeast Two Hybrid method The result is that the number of molecules is equal to the number of molecules. The Biomolecular Fluorescence Complement (BiFC) method was used to visualize molecular interactions in mammalian cells. The BiFC method allows the N fragment of the fluorescent protein to be linked to the candidate molecule Myo5a and the C fragment to be co-introduced into the cultured cells. Therefore, the interaction between the candidate molecule and the candidate molecule can be observed when the fluorescent protein fragments are recombined. 4. The candidate molecules are tuned to, Trappc6B candidate molecules are compared to the strong middle light The molecular structure of ER-Golgi transport is expected to be analyzed in the future.