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放線菌黄色色素生産における最終産物による自己生合成遺伝子群転写抑制の分子機構

放线菌黄色素生产终产物自生物合成基因转录抑制的分子机制

基本信息

批准号：
21580084
负责人：
大西康夫
金额：
$ 3.16万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

放線菌Streptomyces griseusの黄色色素(grixazone、以下GXと略す)生産において、最終生産物であるGXによってGX生合成遺伝子群の転写が抑制される機構があることが示唆されていた。GXをリガンドとする転写抑制因子(GriZ)とGX生合成の経路特異的転写活性化因子(GriR)の機能を抑制するco-repressor (GriU)の2つのタンパク質が、この転写抑制に関わると考えられたおり、その機能の詳細を明らかにすることが本研究の目的であった。昨年度、DNA-GriR-GriUの3者複合体の形成とその性質について、試験管内反応によって詳細に解析し、GriUが結合することでDNA-GriR間の結合が著しく安定化することを示したが、さらにin vitroでの解析を続け、GriUが存在しない時にはRNAポリメラーゼ(RNAP)-GriR-DNAの3者複合体が形成されるのに対して、GriU存在時ではRNAPがDNAに結合できないことを明らかにした。これにより、アンチアクチベーターとしてのGriUの機能を証明することができた。一方、GX(GX-A)を大量調製し、GriZとの結合を詳細に調べようとしたが、以前の結果と異なり、結合が確認できなかった。GriZのリガンドに関しては慎重に検討中である。また、種々の遺伝子破壊株におけるGX生合成遺伝子の転写様式を解析した結果、野生株の培養後期に見られるGX生合成遺伝子の転写抑制にはGriZ-GriU系は関与しないことが明らかになった。これらの結果より、GriUの生体内での機能が当初の想定と異なる可能性が高くなったため、新しい視点からの解析を開始した。

The yellow pigment (grixazone) produced by Streptomyces griseus is inhibited by mechanisms for the production of the final product. The purpose of this study is to investigate the relationship between GX gene expression inhibitor (GriZ) and GX gene expression pathway specific reactivation factor (GriR) and the function of co-repressor (GriU). Last year, the formation and properties of DNA-GriR-GriU three-part complex were analyzed in detail in vitro, the binding between GriU and DNA-GriR was stabilized, and the formation and properties of DNA-GriR-GriU three-part complex were analyzed in vitro, and the RNA (RNAP)-GriR-DNA three-part complex were analyzed in presence of GriU. When GriU exists, RNAP binds to DNA. The function of GriU is demonstrated by the following: A party, GX(GX-A), a large number of modulation, Griz, a combination of detailed adjustment, previous results, a combination of confirmation Griz's attention is focused on careful investigation. Analysis of the expression pattern of GX biosynthetic genes in wild plants and the inhibition of GX biosynthetic genes in late culture of wild plants are related to the Griz-Griu system. The result of this is that the function of Griu in vivo is different from that of the original idea. The possibility of analyzing the new viewpoint is high.