自閉症の発症における関連因子ニューロリギン4の役割の研究

研究相关因子 Neuroligin 4 在自闭症发展中的作用

• 批准号: 21591538
• 负责人: 正木 茂夫
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Institute for Developmental Research, Aichi Human Service Center
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21591538/
• 关键词: ニューロリギン; 酵母ツーハイブリッド; AP-4; シナプス; 自閉症; トランスゴルジネットワーク; 免疫沈降法; AUTS1; トランスゴルジ; 遺伝子

ニューロリギン4とその周辺の因子が自閉症(ASDs, Autism Spectrum Disorders)に関与することが明らかにされている。本研究計画では、ニューロリギン分子種4に注目し「シナプス後膜直下でニューロリギン4がどのような因子と結合しているか」を明らかにして、自閉症発症のメカニズムの解明に近づく研究成果をめざしてきた。酵母ツーハイブリッド法により、ヒト胎児脳発現ライブラリよりAP4M1、CADPS2、CNTN2、FMN2、FRMPD2の部分配列cDNAを持つプラスミドの生成物と、ニューロリギン4細胞内ドメインとの結合を確認した。これらのうち時間や人手の制約から、重点的にAP4M1について解析をおこなった。(1) ニューロリギン4とAP4M1がコードするAP-4μ因子の結合は、それぞれの分子の全長を組み込んだ発現プラスミドを作成し、培養細胞で強制発現させたのち免疫沈降で沈澱にどちらの分子も含まれていることを確認した。(2) 同様な強制発現系を用いて、免疫組織化学染色による分布観察を行なった。ニューロリギン4もAP-4μ因子も共に細胞質に発現して排他的存在様式を示さず、細胞内でも結合しうることを示した。(3) 配列を部分欠失したプラスミドを作成しAP-4μ因子の結合部位を絞り込む試みを行った。全長453アミノ酸のうち1-244と372-453の部分を欠失してもニューロリギン4との結合活性は残っていたので、結合部位を245-371に絞り込んだ。(4) ニューロリギン4細胞内ドメイン側には、知られているソート配列(例えばAP-2での“YXXΦ”のような)は見当たらなかったので、関与アミノ酸を検索するために変異を導入した発現プラスミドを作成した。

ニューロリギン4とそのweek辺のfactorがautism (ASDs, Autism Spectrum Disorders) に关 and することが明らかにされている. This research project focuses on the molecular species 4 of では and ニューロリギン4.子とcombinationしているか』を明らかにして, autistic hysteria のメカニズムの解明にNearly づく research results をめざしてきた. Yeast ツーハイブリッド法により, ヒト fetal 児脳発existing ライブラリよりAP4M1, CADPS2, CNTN2, FMN2, Partially arranged cDNA of FRMPD2 has been confirmed as a product of FRMPD2, and the binding of FRMPD2 in the cells has been confirmed.これらのうちTime and manpower restriction から, the key point is にAP4M1 についてanalysis をおこなった. (1)ニューロリギン4とAP4M1がコードするAP-4μ factorのcombinationは、それぞれのmoleculeのfull-lengthをgroupみ込んだ発appearプThe ラスミドを is made, the cultured cells are forced to show the immunoprecipitation, the molecule is precipitated, and the molecule is confirmed. (2) The same method is used to observe the distribution of the forced appearance system and immunohistochemistry staining. The ニューロリギン4もAP-4μ factor is co-expressed in the cytoplasm and shows its exclusive existence and binding in the cells. (3) The combination of the AP-4μ factor and the AP-4μ factor is partially lost in the arrangement. Full length 453アミノ sour のうち1-244 and 372-453のpartial してもニューロThe binding activity of リギン4 is the residual value, and the binding site is 245-371. (4)ニューロリギン4 intracellular ドメインlateral には, 知られているソート array (for example, えばAP-2での"YXXΦ"のような)は见多たらなかったので、关与アミノ acidを検SOするために変differentを Import した発成プラスミドを成した.

项目成果

ニューロリギン4と&AP-4μサブユニットの結合の特異性の解析

Neuroligin 4与&AP-4μ亚基结合特异性分析

• 发表时间: 2010
• 作者: Aoki N;Tsuchiya K;Togo T;Kobayashi Z;Uchikado H;Katsuse O;Suzuki K;Fujishiro H;Arai T;Iseki E;Anno M;Kosaka K;Akiyama H;Hirayasu Y;鵜飼聡;正木茂夫
• 通讯作者: 正木茂夫