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バベシア原虫感染に対する宿主防御免疫機構の解明と新規ワクチンの開発

巴贝虫原虫感染宿主防御免疫机制的阐明及新疫苗的开发

基本信息

批准号：
09F09338
负责人：
西川義文 (2010-2011)
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Obihiro University of Agriculture and Veterinary Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、新興人獣共通感染症の原因原虫でもあるネズミバベシア原虫(バベシア原虫属の実験モデル原虫として知られる)に焦点を当て、宿主防御免疫機構の解明と新規組換えワクチン開発を目指して企画した。本年度に実施した研究内容と得られた研究成果は以下の通りである。宿主防御免疫機構の解明:1)NK細胞の解析。BALB/cマウスにNK特異抗体(anti-asialo GMI抗体)を頻回投与したところ、NK細胞の特異的欠損が認められた。NK細胞欠損(処置群)と非欠損(非処置群)マウスにそれぞれネズミバベシア原虫(B.microti)を感染させたところ、感染初期においては処置群の方が非処置群と比べ感受性が高い結果が得られた。これらの結果より、NK細胞がネズミバベシア原虫感染において少なくとも感染初期においては宿主の防御免疫に関わっていることが示唆された。2)マクロファージ細胞の解析。BALB/cマウスにCondronate liposmeを投与したところ、体マクロファージ細胞の特異的欠損が認められた。マクロファージ欠損(処置群)と非欠損(非処置群)マウスにネズミバベシア原虫を感染させたところ、感染初期・中期・後期に渡り、処置群の方が非処置群と比べ感受性が顕著に高い結果が得られた。これらの結果より、マクロファージ細胞はネズミバベシア原虫感染において中心的な感染防御免疫担当細胞であることが強く示唆された。ワクチン候補分子の探索:ネズミバベシア原虫と進化的に近縁な多くの原虫でワクチン候補の一つとして知られているApical Membrane Antigen1(AMA1)の同定とクローニングを試みた。他の近縁原虫で保存されている領域にプライマーを設計し、デジェネレートPCR法にて標的遺伝子の増幅を行ったところ、B.microti由来のAMA1遺伝子(BmAMA1)の同定に成功した。BmAMA1遺伝子を大腸菌で発現し組換えBmAMA1タンパク質を作出した。また、組み換えBmAMA1タンパク質をマウスに頻回免疫し、特異抗血清を作出した。この血清を用いて、虫体におけるBmAMA1タンパク質の同定に成功した。

This study focuses on the causes of emerging human-to-human co-infections, the understanding of host defense immune mechanisms, and the development of new protocols. This year's research results are as follows: Explanation of host defense immune mechanism:1) Analysis of NK cells. BALB/c anti-GMI antibodies are frequently used to detect NK cell-specific defects. NK cells are deficient (treatment group) and non-deficient (non-treatment group). They are infected with B.microti. In the early stage of infection, they are deficient in treatment group and non-treatment group. As a result, NK cells are produced in response to protozoan infection. In the early stages of infection, the host's defense is involved. 2) Cell analysis. BALB/c Condronate liposme, body damage The results of infection, early infection, middle infection, late infection, treatment, and non-treatment were as follows: The result is that the cells responsible for infection defense in the center of protozoan infection are strong. The study of candidate molecules: the evolution of protozoa, the evolution of protozoa, the identification of Apical Membrane Antigen1(AMA1), and the evolution of protozoa. The identification of AMA1 gene (BmAMA1) from B.microti by PCR was successful. BmAMA1 gene is detected in E. coli. BmAMA1 is the most effective antiserum for immune response. The serum was used to identify the BmAMA1 gene.