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新奇翻訳伸長因子の機能解析に基づく真核生物のタンパク質合成システム進化の全容解明

基于新型翻译延伸因子的功能分析完整阐明真核蛋白质合成系统的进化

基本信息

批准号：
09J00528
负责人：
神川龍馬
金额：
$ 2.18万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでにEFLのみを有すると考えられてきたカタブレファリス類において、Poombia sp.はEF-lalphaを有することを逆転写PCRによって明らかとした。本種のEST解析をその後に行ったところ、本EF-lalpha配列が同定されたがEFL配列は同定されなかったことから、本種はEF-lalphaのみを有することが強く示唆される。本解析によってカタブレファリス類においても、EFLおよびEF-lalpha遺伝子は混在しており、このような分布を示すに至った両遺伝子の複雑な進化過程が予想された。カタブレファリス類はクリプト藻類やゴニオモナス類と近縁であるとされている。クリプト藻類はEFLのみを有し、そしてゴニオモナス類はEFLのみを持つ種、EF-lalphaのみを持つ種、両遺伝子を持つ種が混在することが明らかとなっていることから、カタブレファリス類・クリプト藻類・ゴニオモナス類への進化過程で遺伝子の独立した喪失が起こったことが強く示唆される。また、in vitro実験系において通常のEF-lalphaと同様に、珪藻EFLタンパク質がGTP加水分解活性にともなうタンパク質合成能があるかを再検証することを試みた。EFLの機能解析に供するサンプルを作成するため、昨年度と異なり、C末領域にタグを追加したEFLリコンビナントタンパク質を大量発現する大腸菌を作成した。C-末端領域に結合させたHQタグを利用してカラム精製を行った。このリコンビナントタンパク質がGTPおよび蛍光アミノアシル-tRNAに結合するか調べた結果、本リコンビナントタンパク質はGTPおよびアミノアシル-tRNAに結合することが分かった。本研究成果は、追試実験が必要であるものの、この段階で特別研究員を辞退したため、追試および条件最適化の検討を行うことはできなかった。

This is the first time I've ever seen a person who's been in a relationship with a person who's been in a relationship with someone else. The EST analysis of this species is based on the sequence analysis, the EF-alpha alignment is based on the sequence analysis, and the EF-alpha alignment is based on the sequence analysis. This paper analyzes the complex evolution process of EFL and EF-alpha genes in the distribution of EFL and EF-alpha genes. The most important thing is that we should be able to do something about it. The evolution of algae, including EFL, has its origin, origin, and origin. The evolution of algae, including EFL, has its origin, and origin. In the vitro system, the EF-alpha is usually the same as the EF-alpha, and the EF-alpha synthesis activity of GTP is also tested. The function analysis of EFL is to create a large number of coliform bacteria in the field of EFL. C-terminal domain is combined with HQ domain. The results of this study are as follows: 1. The content of GTP and GTP in the sample is different from that of GTP and GTP in the sample. The results of this research are necessary, necessary, and special researchers are dismissed, and conditions are optimized.