神経芽腫モデルマウスを用いた新規制御因子の探索と機能解析

使用神经母细胞瘤模型小鼠寻找新的调节因子和功能分析

• 批准号: 09J00808
• 负责人: 小出 直史
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J00808/
• 关键词: 神経芽腫; MYCN; マイクロアレイ; tumor sphere; Csrnp3; Dock4; Pik3r1; 自然発症モデル; Tumor sphere; 神経幹細胞; MYCNトランスジェニックマウス; siRNA; shRNA; ノックダウン

申請者らは、これまでの結果として、MYCN-トランスジェニックマウスの腫瘍組織から単離・培養したtumor sphereとマウス海馬由来の神経幹細胞との網羅的遺伝子解析からtumor sphereと腫瘍発生を結びつけるヒントを掴むに至らなかった。また、我々は昨年までの網羅的解析から得られた候補遺伝子の中から、NeuroD1と神経芽腫の進展について報告をした(Huang et al. 2011 Cancer Res)。しかし、候補遺伝子が多いこと、多くの候補遺伝子に対して並列化できるスクリーニング系を持っていないこと、そして将来的な研究の効率を考慮して候補の絞り込みに必要な情報を再構築することとした。はじめに、tumor sphereが腫瘍発生因子や進展因子をenrichしていると仮定し、tumor sphereと腫瘍組織の発現プロファイルを次世代シークエンサーで解析した。その結果、tumor sphereで発現量が2倍以上高い遺伝子を111個ピックアップした。次に、正常な腹腔交感神経節と腫瘍組織の発現プロファイルについてマイクロアレイを用いて解析した。その結果、腫瘍組織で発現量が2倍以上高い遺伝子を726個ピックアップした。続いて、それらで共通してピックアップした遺伝子について、オランダの臨床データベースR2を用いて発現量と生存曲線の相関をとり、有意差のある遺伝子を3つ(Csrnp3,Dock4,Pik3r1)ピックアップした。そして、絞り込んだ3つの遺伝子についてin situ hybridizationとqPCRを用いて時系列毎の発現プロファイルを解析した。その結果、モデルマウスにおいて腫瘍が発生すると考えている生後2週の段階で3遺伝子とも興味深い挙動を示した。現在、過剰発現ベクターとshRNA、siRNAのデザインを進め、神経芽腫細胞株を用いて候補遺伝子の詳細な機能解析を進めている。

The applicant's results are as follows: MYCN-Torransj The analysis of the results of this study was reported in the progress of NeuroD1 and Neuroblastoma (Huang et al. 2011 Cancer Res). For example, if the candidate information is more than one, the candidate information is more than one. If the candidate information is more than one, the candidate information is more than one. If the candidate information is more than one, the candidate information is more than one. Tumor sphere development factors and progression factors are enriched and analyzed in the next generation. As a result, the tumor sphere was more than twice as high as 111 times higher. In addition, normal abdominal sympathetic ganglion and tumor tissue development and analysis The results showed that the number of tumor tissues detected was more than twice that of the original 726. The correlation between R2 and survival curve is detected by the common gene, and the intentional difference is detected by the gene 3 (Csrnp3,Dock4,Pik3r1). In addition, the analysis of the sequence of events in situ hybridization and qPCR was carried out. The results of the study showed that there was no significant change in the development of the disease in the first 2 weeks of life. Now, we have developed a new gene for shRNA and siRNA, and we have developed a new gene for neuroblastoma cell line.

项目成果

ESTABLISHMENT AND OPTIMAL CULTURE CONDITIONS OF MICRORNA-INDUCED PLURIPOTENT STEM CELLS GENERATED FROM HEK293 CELLS VIA TRANSFECTION OF MICRORNA-302S EXPRESSION VECTOR

• 发表时间: 2012-02
• 期刊: Nagoya Journal of Medical Science
• 影响因子: 0.9
• 作者: Naoshi Koide;Kaori Yasuda;K. Kadomatsu;Y. Takei

Comprehensive analysis of array-based platforms for mirPS ceils reprogrammed from HEK293 cells by transduction of miR-302 family

通过转导 miR-302 家族从 HEK293 细胞重编程的 mirPS 细胞的基于阵列的平台的综合分析

• 发表时间: 2011
• 作者: N Koide;Y Takei
• 通讯作者: Y Takei

難治性腹圧性尿失禁症例,脂肪組織由来幹細胞注入療法の経直腸造影超音波イメージング

顽固性压力性尿失禁病例经直肠超声造影、脂肪组织干细胞注射治疗

• 发表时间: 2010
• 作者: 山本徳則;青木重之;小出直史;舟橋康人;佐々直人;吉野能;河津政範;土屋拓真;青木久佳;服部良平;後藤百万
• 通讯作者: 後藤百万

NeuroD1 Downregulates Slit2 Expression and Promotes Cell Motility and Tumor Formation of Neuroblastoma.

NeuroD1 下调 Slit2 表达并促进神经母细胞瘤的细胞运动和肿瘤形成。

• 发表时间: 2011
• 期刊: Cancer Res.
• 作者: Huang P;Kishida S;Cao D;Murakami-Tonami Y;Mu P;Nakaguro M;Koide N;Takeuchi I;Onishi A;Kadomatsu K.
• 通讯作者: Kadomatsu K.

Isolation of tumor-iitiating cells from tumors MYCN-transgenic mice.

从肿瘤 MYCN 转基因小鼠中分离肿瘤起始细胞。

• 发表时间: 2009
• 作者: 廣内智之;都留智仁;渋谷陽二;小出直史
• 通讯作者: 小出直史