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細胞内外のストレスに応答するKeap1-Nrf2システムの多様な感知機構

Keap1-Nrf2系统响应细胞内和细胞外应激的多种传感机制

基本信息

批准号：
09J00858
负责人：
李麗
金额：
$ 0.9万
依托单位：
University of Tsukuba
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J00858/
关键词：
Keap1 Nrf2 小胞体ストレス PERK ATF4 過酸化水素トランスジェニックGFPフィッシュ

项目摘要

本研究の目的は,Keap1-Nrf2システムのストレス応答機構のセンサー分子の同定と具体的な分子基盤を解明する。22年度では主に小胞体ストレスセンサーの同定を行た。これまでの研究では,小胞体ストレスによるNrf2の活性化はPERKが関わることが示唆した。今年度は,このポイントを捕まて,研究を展開した。まず最初はPERKを単離した。初期胚の解析系を利用し,Keap1とNrf2と共発現した。しかしPERKの存在下でもNrf2の活性化が観察されなかた。PERKの下流因子ATF4に注目。ATF4も単離した。同じくKeap1とNrf2と初期胚に共発現した。その結果Nrf2の活性は見れた。Keap1-Nrf2システムは小胞体ストレスへの応答にはATF4が重要であることが示唆した。また,5日胚を用いる,knock down解析をした。5日胚は小胞体ストレス誘導剤に反応できなくなたことを検出した。初期胚免疫染色解析の結果からATF4はNrf2タンパク質の安定性に関わることを証明した。ATF4のNrf2を活性化する機構をさらに理解するため,ATF4の分子解析を行た。DNA結合ドメインやヘテロダイマー形成ドメインに点変異を導入した。初期胚の解析系にKeap1とNrf2と共発現し,Nrf2の活性化が検討した。両方とも野生型ATF4よりNrf2の活性化が減少した。その結果から,b-ZipドメインはNrf2の活性化に重要であることを示唆した。以上の結果から,小胞体ストレスによる,PERK系路が活性化し,その下流のeIF2aがりん酸化する(eIF2aりん酸化抗体を用いた免疫プロト検討の結果により),ATF4が翻訳され,そのことによりNrf2を活性化する。これまでの小胞体ストレスセンサーに関する研究では培養細胞を利用したものが多く,PERKがNrf2を直接にりん酸化することと考えられているが,今回の研究からPERKではなくその下流にあるATF4はNrf2を活性化する重要な因子と証明した。

The purpose of this study is to clarify the structure of the Keap1-Nrf2 molecule and its specific molecular basis. In the 22nd year, the main body of the small cell body is the same as the set line.これまでの Research では, small cell body ストレスによるNrf2 Activation PERK が Off わることが Show した. This year's research has been carried out, and the research has been carried out.まずInitiallyはPERKを単里した. The analysis system of the early embryo was used, and Keap1 and Nrf2 were co-produced. In the presence of PERK, the activation of Nrf2 was detected. PERK's downstream factor ATF4 is attracting attention. ATF4も単里した. The same as Keap1, Nrf2 and early embryo. The result of Nrf2 is the activity of Nrf2. Keap1-Nrf2 is an important component of ATF4.また, 5日Embryonic を Use いる, knock down analysis をした. On the 5th day of the pregnancy, the small cell body of the embryo is induced and the reaction is induced. The results of immunostaining analysis of early embryos were confirmed by the stability of ATF4 and Nrf2 quality and their stability. ATF4's Nrf2 activation mechanism is understood, and ATF4's molecular analysis is performed. DNA combines with DNA to form a DNA-conjugated DNA. The analysis of early embryos shows that Keap1 and Nrf2 coexist and activate Nrf2. The wild-type ATF4 and the activation of Nrf2 are reduced. The results of b-Zip and the activation of Nrf2 are important. The results of the above are: small cell body activation, PERK activation, downstream eIF2a acidification (eIF2 a Acidified antibody is used to immunize the result of いたimmunization (により), ATF4 is turned over, and そのことによりNrf2 is activated.これまでのsmall cell body ストレスセンサーに关する research では cultured cells をUse したものが多く, PERKがNrf2をdirectly acidify することと考えられているが, this time's research からPERK ではなくそのdegradation にあるATF4はNrf2をactivation するimportant なfactor とprove した.