哺乳類精子鞭毛における分子アーキテクチャーの研究

哺乳动物精子鞭毛分子结构的研究

基本信息

批准号：
09J01327
负责人：
村山絵美
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J01327/
关键词：
Tektin5 Gcl-2 Tektin4 Odf1 精子鞭毛細胞骨格

项目摘要

申請者がクローニングしたTektin5およびGcl-2は蛋白質の局在と特徴から、軸糸周辺構造体を統合して機能的な鞭毛構造を作り出すための細胞骨格として働くことが推測された。さらにTektin5をbaitとした酵母Two-Hybrid法によって単離したTektin5と相互作用する分子、Tektin4およびOdfl、およびGcl-2をbaitとした酵母Two-Hybrid法によって単離したGcl-2と相互作用する分子、Gcl-2BP1はこれらの分子間結合によって、哺乳類精子鞭毛の構造維持や運動の増幅に関与していると考えられる。そこでTektin4、Odf1およびGcl-2BPIについて、1、遺伝子の発現解析および蛋白質の発現・局在解析、2、分子間相互作用の解析、を行った。1、Tektin4、Odf1は既知遺伝子であり、論文等により、Tektin4についてはmRNAは4週齢以降発現し、蛋白質は精子鞭毛中片・主部のODF皮質に局在する、Odf1についてはmRNAは30日齢以降発現し、蛋白質は精子鞭毛の中片に局在することが分かった。Gcl-2BP1については、臓器別RT-PCRの結果、mRNAは精巣・肺・心臓で発現が見られ、週齢別RT-PCRの結果、3週齢以降で発現が見られた。さらに、1%S-EDTAで処理を行った精子のウエスタンブロットの結果、Gcl-2BP1は1%S-EDTAでは溶出しない分画に検出された。また、精子の免疫染色の結果、精子鞭毛中片に局在することが確認された。2、Tektin5とTektin4およびTektin5とOdf1について、哺乳類培養細胞を用いて発現解析を行ったところ、Tektin5とTektin4およびTektin5とOdf1の細胞内における局在が一致した。さらに哺乳類培養細胞をもちいたTwo-Hybrid法によってTektin5とTektin4およびTektin5とOdf1の分子間相互作用の解析を行った結果、これらが細胞内において相互作用していることが確認された。このように得られた分子について解析することで、Tektin5およびGcl-2の精子鞭毛における存在意義、即ち生理的機能を解明することが出来る。

蛋白质的定位和特征表明，申请人作用克隆的Tektin5和Gcl-2是整合周围结构以创建功能性鞭毛结构的细胞骨架。 Furthermore, it is thought that Gcl-2BP1, a molecule that interacts with Tektin5, isolated by the yeast Two-Hybrid method using Tektin5 as bait, and Gcl-2BP1, an molecule that interacts with Gcl-2, isolated by the yeast Two-Hybrid method using Gcl-2 as bait, is involved in maintaining the structure of mammalian sperm flagella and amplifying the motility through these分子间键。因此，我们对Tektin4，ODF1和GCL-2BPI进行了1，基因表达分析，蛋白质表达和定位分析以及2，分子间相互作用分析。 1. Tektin4 and Odf1 are known genes, and according to papers, it was found that mRNA is expressed after 4 weeks of age for Tektin4, protein is localized to the ODF cortex of the main and main parts of the sperm flagella, and mRNA is expressed after 30 days of age for Odf1, and protein is localized to the bacterial fragments of the sperm flagella.关于GCL-2BP1，器官特异性的RT-PCR表明mRNA在睾丸，肺和心脏和心脏中表达，并且特定于周的RT-PCR表明它在3周龄和年龄后表达。此外，用1％S-EDTA处理的精子的蛋白质印迹显示，在未用1％S-EDTA洗脱的馏分中检测到GCL-2BP1。此外，精子的免疫染色证实了它位于精子鞭毛。 2。使用培养的哺乳动物细胞对Tektin5和Tektin4，Tektin5和ODF1进行了表达分析，细胞中Tektin5和Tektin4，Tektin5和ODF1的定位是一致的。此外，使用涉及培养的哺乳动物细胞的两杂化方法对Tektin5和Tektin4和Tektin5和ODF1之间的分子间相互作用进行分析证实了这些相互作用是内细胞内的。通过分析以这种方式获得的分子，可以阐明Tektin5和Gcl-2在精子鞭毛中的重要性，即生理功能。