カイコPiwiサブファミリーのヘテロクロマチン形成誘導とゲノム安定化機構

家蚕Piwi亚科异染色质形成的诱导和基因组稳定机制

• 批准号: 09J01682
• 负责人: 田附 常幸
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J01682/
• 关键词: カイコ; Piwi; HP1; Nuage; ヘテロクロマチン; トランスポゾン; RNAサイレンシング; piRNA; テロメア

これまでにBimolecular Fluorescence Complementation (BiFC)法で確認されたカイコ HP1とPiwiタンパク質の相互作用をInsect two-hybrid system (12H)を用いて追試した。その結果、BiFC法による解析の結果と同様にカイコHP1とPiwiの間に相互作用が認められた。また、RNAiを高効率で誘導できる培養細胞BmN4-SID1を用いて、カイコPiwiとHP1の相互作用の関係をRNAiと12Hを用いて解析したところ、カイコPiwiとHP1βの相互作用にはHP1αが必要であることが明らかとなった。さらに、piRNA顆粒の一つであるNuage様の顆粒構造中で確認されたAgo3-Siwiの相互作用および局在にpiRNA関連因子が関与しているか否かをpiRNA関連因子をノックダウンしたBmN4-SID1においてBiFC法によって解析した。その結果、Nuage関連因子と考えられるVLG、Tudor、Spindle-Eノックダウン細胞においてBmAgo3-Siwiの局在の乱れが確認されたが、他のpiRNA顆粒としてショウジョウバエで報告されているYb-bodyの構成因子のホモログであるカイコArmitageおよびYbはノックダウンを行なってもBmAgo3-siwiの局在に影響を与えなかった。さらに、抗 Yb 抗血清を用いて培養細胞BmN4の免疫染色を行なったところ、BmN4ではYbを含む顆粒は観察されなかった。したがって、BmN4にはYb-body様の構造体は存在しないと考えられる。これまでの結果より、BmN4においてはカイコPiwiタンパク質の多くは細胞質中に顆粒として存在するが、一部が核内でHP1との相互作用を介して染色体構造変換に関与し、それらのPiwiタンパク質がクロマチン構造を制御しているモデルが考えられる。

The Bimolecular Fluorescence Complement (BiFC) method was used to confirm the interaction between HP1 and Piwi 2 and to Insect a two-hybrid system (12H). The results of BiFC analysis are the same as those of HP1 and Piwi interaction. The interaction between RNAi and HP1 in cultured cells BmN4-SID1 was analyzed by RNAi and HP1 β interaction. In addition, in the particle structure of piRNA particles, it was confirmed that the interaction between Ago3-Siwi and piRNA related factors was related to the analysis of piRNA related factors by BiFC method. The results showed that Nuage correlation factors and BmAgo3-Siwi effect in VLG, Tudor, Spindle-E and BmAgo3-Siwi cells were confirmed, and other piRNA particles were reported. Immunostaining of BmN4 cells with anti-Yb antiserum was performed. BmN4 Yb-body structure exists in the structure. As a result, BmN4 has been found to be involved in the regulation of chromosome structure by the presence of particles in the cytoplasm of many cells, partly by the interaction of HP1 in the nucleus, and partly by the regulation of chromosome structure.

项目成果

Search and analysis of silenced genomic region in the silkworm, Bombyx mori

家蚕Bombyx mori基因组沉默区域的搜索与分析

• 发表时间: 2011
• 期刊: Entomotech
• 作者: Masaki;et al
• 通讯作者: et al

カイコ培養細胞BmN4におけるPiwiサブファミリータンパク質の転写抑制への関与

Piwi 亚家族蛋白参与培养蚕细胞 BmN4 的转录抑制

• 发表时间: 2010
• 作者: Masaki;et al;田附常幸;田附常幸
• 通讯作者: 田附常幸

カイコPiwiタンパク質による転写抑制効果の解析

家蚕Piwi蛋白转录抑制作用分析

• 发表时间: 2010
• 作者: Masaki;et al;田附常幸
• 通讯作者: 田附常幸

カイコ培養細胞におけるPiwiサブファミリーの局在とトランスポゾンの発現抑制

培养蚕细胞中Piwi亚家族的定位及转座子表达的抑制

• 发表时间: 2009
• 作者: Masaki;et al;田附常幸;田附常幸;田附常幸
• 通讯作者: 田附常幸