权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

マウス胚性幹(ES)細胞における未分化維持関連因子DPPA4の機能解析

小鼠胚胎干（ES）细胞维持未分化相关因子DPPA4的功能分析

基本信息

批准号：
09J02104
负责人：
正木久晴
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J02104/
关键词：
ES細胞クロマチン iPS細胞 FRAP解析

项目摘要

ES細胞は未分化状態のまま増殖でき、生体の細胞全てに分化できることから、再生医療への応用が期待されている。しかしながら、ES細胞の重要な性質である未分化維持機構には未だ不明な部分が多い。一因として、機能未知因子が多数発現していることが挙げられる。そこで私は、未知因子であるDPPA4の解析を行っている。以前に私はDPPA4が転写活性クロマチンに局在し、マウスES細胞の未分化維持に重要であることを発表した。また、昨年度までに、マウスES細胞においてDPPA4はリンカーヒストンH1と非常に近い可動性を持つこと、DNAとコアヒストンH3それぞれと直接結合すること、in vitroにおいてクロマチン構造を変化させることを明らかにした。以上の結果から、DPPA4はH1と同様にマウスES細胞においてクロマチン構造の調節に関与している可能性が示された。今年度は、ヒトでもDPPA4が同様の役割を果たしているか調べるため、ヒトiPS細胞を用いて同様の解析を行った。まず、DPPA4のヒトiPS細胞における局在を免疫染色により調べると核には局在していたが、マウスと比べてDPPA4は低塩濃度で可溶化し、クロマチンとの結合が弱いことが示唆された。さらに、FRAP解析によりヒトiPS細胞におけるDPPA4の可動性を調べた結果、マウスES細胞と比べてDPPA4、H1共に蛍光の回復が早く、可動性が高いことが解った。また、in vitroで再構成したクロマチンにヒトDPPA4を加えると、マウスDPPA4を加えた場合と同様にMNaseに対する抵抗性が増強されたことから、ヒトDPPA4もクロマチン構造を変化させる機能を持つことが示唆された。以上の結果から、ヒトDPPA4もクロマチン構造調節に関与していることが示唆された。また、マウスES細胞とヒトiPS細胞のクロマチン構造には違いがある可能性も示された。

ES cells grow in an undifferentiated state, cells fully differentiate in living organisms, and are expected to be used in regenerative medicine. The important properties of ES cells are unknown. A cause, a function unknown factor, a majority of the occurrence, a cause, a function unknown factor, a function unknown factor. The analysis of DPPA4 is based on unknown factors. In the past, DPPA4 was found to be active in the development of ES cells. In the past, DPPA4 was isolated from ES cells, and H1 was isolated from ES cells. DNA was isolated from ES cells and H3 was isolated from ES cells. The above results show that DPPA4 is related to the regulation of ES cell structure. This year, DPPA4 is used to analyze the same pattern. In addition, DPPA4 and iPS cells were found to be soluble in low concentrations. The mobility of DPPA4 in iPS cells was modulated by FRAP analysis. ES cells recovered earlier than DPPA4 and H1 cells, and the mobility was higher. In addition to DPPA4, the resistance of MNase to MNase is increased in the case of in vitro reconstitution. The above results show that DPPA4 has a strong structural adjustment effect. The structure of ES cells and iPS cells is not consistent with the probability of death.