高等動物の脳神経系におけるキシロース含有N型糖鎖の高次機能発現メカニズムの解明

高等动物神经系统中含木糖N-聚糖高级功能表达的机制的阐明

基本信息

批准号：
09J02854
负责人：
矢木宏和
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Nagoya City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、神経系におけるキシロース含有糖鎖が関与する分子間ネットワークを明らかにすることを通じてこの糖鎖の担う機能の解明を目指している。本年度はまずin situハイブリダイゼッションにより、aer61およびago61のmRNAはともにマウスの大脳、海馬、小脳に発現量が多く、また特にニューロンに発現していることが明らかとなった。今後、これらの遺伝子発現が多い部位に着目して糖鎖分析を行うことにより、キシロース含有糖鎖を探索する予定である。この2つのキシロース転移酵素様タンパク質のin vitro反応におけるキシロース転移活性を評価した。基質分子として、N型糖鎖の生合成過程に存在する一連の糖鎖を2-アミノピリジン誘導体を調製した。しかしながら現状では、大腸菌および動物細胞を用いて発現させたリコンビナントキシロース転移酵素様タンパク質の活性は検出できていない。酵素活性を持つには他のコファクター存在が考えられるため、今後これらキシロース転移酵素様タンパク質を導入した細胞に発現している糖鎖の構造を解析することにより、この酵素の活性評価を行う予定である。さらにはaer61およびago61の遺伝子欠損マウスを樹立した。aer61の遺伝子欠損ホモマウスは正常に生まれてくるのに対し、ago61の遺伝子欠損ホモマウスは胎生致死であることを明らかにした。今後、ago61遺伝子欠損マウス胎生致死の原因を明らかにすることで、キシロース含有糖鎖の機能を明らかにしていく予定である。

这项研究旨在通过揭示涉及神经系统中涉及含木糖聚糖的分子间网络来阐明这些聚糖发挥的功能。今年，原位杂交据表明，AER61和AGO61 mRNA均在大脑，海马和小脑表达高的小鼠中表达，并且在神经元中尤其表达。将来，我们计划通过专注于具有高基因表达并进行聚糖分析的位点来搜索含木糖的糖链。评估了这两个木糖转移酶在体外反应中的木糖转移活性。作为底物分子，制备了N型糖链生物合成过程中存在的一系列糖链的2-氨基吡啶衍生物。然而，目前尚未检测到使用大肠杆菌和动物细胞表达的重组氧化氧基样蛋白的活性。由于其他辅助因子可能具有酶活性，因此我们计划通过分析在这些细胞中表达的聚糖的结构来评估该酶的活性，这些聚糖的结构已引入了这些木糖转移酶样蛋白。此外，还建立了缺乏AER61和AGO61基因的小鼠。我们发现缺乏AER61基因的HOMO小鼠正常出生，而缺乏AGO61基因的HOMO小鼠是胚胎致死的。将来，我们计划通过阐明缺乏AGO61基因的小鼠胚胎致死性的原因来阐明含木糖的聚糖的功能。