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ファーマコプロテオミクスによる薬物の脳移行機構の解明

利用药物蛋白质组学阐明药物的脑转运机制

基本信息

批准号：
09J03270
负责人：
伊藤克彰
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J03270/
关键词：
トランスポーター血液脳関門プロテオミクス薬物動態

项目摘要

血液脳関門におけるinfluxトランスポーター候補分子の発現スクリーニングを、組織サンプルの確保が容易な実験動物を用いて、質量分析装置によるタンパク発現量解析により行った。実験動物は、昨年度の研究成果から、血液脳関門におけるトランスポーター発現量プロファイルがヒトに近いカニクイザルを用いた。解析対象分子は、多くの薬物の細胞内取り込み輸送に関与するOAT(Organic anion transporter)及びOATP(Organic anion transporter polypeptide) familyを中心に、SLCトランスポーターを選択した。その結果、サル脳毛細血管において1分子の有機アニオントランスポーターが定量され、ヒトにおいても同一の有機アニオントランスポーターが定量できた。ここで当初は、質量分析装置による解析のみの発現スクリーニングを予定していた。しかし、予備検討の結果、DNAチップ解析によるスクリーニングも可能であると考えられた。従って、より網羅的なスクリーニングとしてDNAチップ解析を行い、その結果を基に質量分析装置によるタンパク発現量の定量を行った。結果として、新たに1分子の有機アニオントランスポーターが、ヒトおよびサル脳毛細血管、ヒト血液脳関門モデル細胞(hCMEC/D3細胞)においてタンパクレベルで定量できた。このトランスポーターに関してノックダウン実験を行ったところ、hCMEC/D3細胞への生理的基質の取り込みの大部分に寄与していることが明らかとなった。ここで、ヒト脳毛細血管とhCMEC/D3細胞におけるタンパク発現量の定量的な比較から、in vivoのヒト血液脳関門においても、基質の脳毛細血管への取り込みの大部分に寄与していると考えられた。加えて、基質のhCMEC/D3細胞への取り込みは、カルボキシル基を持つ薬物によって阻害されたことから、可能性の一つとして、このトランスポーターがカルボキシル基を持つ薬物を基質認識していることが考えられた。これらの研究成果は、ヒトにおける薬物の脳移行性予測の基盤構築に寄与するものであり、本研究の目標は達成されたと考えられる。

Blood sample preparation and tissue sample preparation are easy to use in animals and mass analyzers. The research results of the animal and the last year were published, and the blood samples were collected and used. Analysis of target molecules: OAT(Organic anion transporter) and OATP (Organic anion transporter polypeptide) family center, SLC selection The results show that the concentration of the organic phase of the capillary molecule is higher than the concentration of the organic phase of the capillary molecule. The quality analysis device can be used to analyze the initial and final results. The results of the preliminary investigation, DNA analysis, and the results of the preliminary investigation were analyzed. The analysis of DNA fragments and the quantification of DNA fragments by mass spectrometry The results showed that there was no significant difference between the two groups in the amount of HMEC/D3 cells and HMEC/D3 cells. The physiological matrix of hCMEC/D3 cells is mainly composed of the following components: A quantitative comparison of the amount of blood and matrix in the capillaries of hCMEC/D3 cells. In addition, the matrix of hCMEC/D3 cells is selected from the group consisting of a group of molecules, a group of molecules, and a group of molecules. The results of this research are as follows: 1. The structure of the matrix for the prediction of migration of organic matter