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微生物を利用した機能性RNA発酵生産法

利用微生物发酵生产功能性RNA的方法

基本信息

批准号：
09J03921
负责人：
鈴木宏道
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Toyohashi University of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

機能性RNA(リボザイム、RNAアフタマー、siRNA)は遺伝子発現制御機能を有することから、様々な疾患に対する夢の新薬として期待されており、事実、医薬品として利用されつつある。このため今後機能性RNAの高い需要が予期されることから、機能性RNAの大量生産技術は必要不可欠である。しかし機能性RNAの大量生産を目指す際、現存するRNA合成法ではコスト、簡便性の面で多くの問題を抱えている,そこで解決策として培養液中へ自身のDNA、RNAを放出する海洋性光合成細菌Rhodovulum sulfidophilumを用い、機能性RNAを発酵生産させることを考案した。現在までに本菌由来の転写プロモーターとその下流に機能性RNA配列を組込んだプラスミドDNAを本菌へ導入することにより、機能性RNAを培養液中へ生産させることに成功している。しかし現時点における問題点として機能性RNAの生産量が多くないことが挙けられた。そこで当該年度においても昨年度と同様に、機能性RNAの生産量増大を目指した。方法として1.菌体内で機能性RNAを合成するための高活性転写プロモーターの更なる改良2.機能性RNA遺伝子を組込んだ高コピー数プラスミドDNAの利用1.においては、以前まで用いてきた高活性転写プロモーターよりもおよそ2倍の機能性RNAの生産量を示すプロモーターを得ることができた。2.においては、以前まで用いてきたプラスミドDNAの細胞内コピー数の3倍程度の新たなプラスミドDNAを用いることで、機能性RNAの生産量を2～3倍程度増加させることに成功した。以前までの比較として機能性RNAの生産量は全体で約5倍量増加させることに成功し、このこと基現存するRNA合成法の合成量に大きく近づいたと言える。産業的応用には更なる機能性RNAの生産量増大は必要であるが、本年度の結果は本菌を用いた機能性RNAの発酵生産の実用化に向け、大きく貢献した。

Functional RNA (リボザイム, RNA アフタマー, siRNA) は heritage 伝 son 発 now suppression function をすることから, others 々な disorders にす seaborne る dream の new 薬として expect されており, things be, medical 薬として using されつつある. このため future functional RNA の high い need が to period されることからの mass production technology, functional RNA は need not owe である. しかし functional RNA の mass-produced を refers す interstate, existing する RNA synthesis ではコスト, simples の surface でくの problem を embrace えている, そこで solving strategy としのへ itself in て cultures of DNA, RNA を released する maritime Rhodovulum photosynthetic bacteria sulfidophilumを is used for the fermentation of させる and functional RNAを to produce させるとを. Study case させるた. Now までに this bacteria origin の planning write プロモーターとその obscene に functional RNA with column group を込んだプラスミド DNA を this bacterium へ import することにより, functional RNA を medium, へ production させることに successful している. The current point of <s:1> the problem point of とて the production volume of て functional RNA is が high くなとが挙けられたとが挙けられたとが挙けられたとが挙けられたとが挙けられたとが挙けられた Youdaoplaceholder0 ででで when the におてててててで in the current year is the same as that in the previous year and the production of functional RNA is increased を, it indicates that た. Methods として 1. Bacteria in the body ですを functional RNA synthesis るための highly active planning write プロモーターの more なる improved 2. Traces of functional RNA 伝 son を group 込んだ high コピー number プラスミドの DNA using 1. においては, before まで with いてきた highly active planning write プロモーターよりもおよそ 2 times のの functional RNA production を shown すプロモーターを must ることができた. 2. においては, before まで with いてきたプラスミドの DNA in cells コピー number 3 times の degree の new たなプラスミドを DNA with いることので, functional RNA production を degree of 2 ~ 3 times raised plus させることに successful した. Before までの is としての functional RNA production は all で about five times the amount raised add させることに successful し, このこと base existing するに large amount of RNA synthesis の synthetic きく nearly づいたと said える. Industry 応 with には more なるの functional RNA production raised large は necessary であるが, this year's の results は this bacterium をいた functional RNA の発 yeast production の be use to けに, big きく contribution した.