脱細胞化角膜実質を用いた再生型人工角膜の開発と特性評価

使用脱细胞角膜基质再生人工角膜的开发和表征

基本信息

批准号：
09J04930
负责人：
橋本良秀
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度は、脱細胞化角膜実質の移植用角膜としての有用性を調べるために、脱細胞化角膜実質上における角膜上皮再生および脱細胞化角膜の深層移植による角膜再生およびin vitroにおける角膜内皮細胞層の再構築を試み、総合的な角膜再生技術の創製について検討した。ウサギの上皮欠損モデルを作製し、脱細胞化角膜の再上皮化をフルオレセイン染色により経時的に観察した結果、移植後2-3週間で角膜上皮が脱細胞化角膜を被覆し、欠損前の角膜上皮と全く変わらない機能を発現していることが明らかとなった。術後6ヶ月後のHE染色像から、血管新生および角膜上皮細胞のダウングロースは観察されず、移植片上でケラチン陽性の角膜上皮様構造を形成していることが明らかとなった。角膜上皮は再生能力が高いことが知られているが、これまでのコラーゲンゲルと比較して、再生期間が大幅に短縮されており、脱細胞化角膜が上皮の再生に寄与していることが示唆された。また、脱細胞化角膜を深層角膜移植した結果、移植片は徐々に透明化し、移植後4ヶ月で完全に透明化した。一方、移植片の再上皮化は、約3ヶ月の期間を要した。移植後6ヶ月間の経過観察を行い、組織学的に評価した結果、移植片上に重層化したケラチン陽性の角膜上皮様構造が観察された。移植片内部では、角膜実質細胞の浸潤が認められ、移植した脱細胞化角膜とレシピエント角膜との明瞭な境界が見られないことから、移植片のリモデリングが行われていることが示唆された。さらに、in vitroにおいて脱細胞化角膜に初代ブタ角膜内皮細胞あるいは株化ヒト角膜内皮細胞を播種することによって、正常角膜内皮に類似した細胞形態を示す単層の角膜内皮細胞層を再構築することに成功した。

在今年，为了研究脱细胞角膜实质作为移植的角膜的有用性，我们尝试通过深层移植脱皮的角膜和角膜角膜的深层移植角膜结构，并在角膜细胞的重建中，并在Corner中进行了综合的培训，并通过对角膜细胞的重建进行了重建，并试图对脱细胞的角膜顶和角膜重新再生进行角膜上皮再生。我们创建了一个兔上皮缺陷模型，并使用荧光素染色观察到脱细胞角膜的重新上皮化，并发现角膜上皮在植入后2-3周覆盖了脱皮的角膜，并表达了与缺陷之前的角膜上皮完全不同的功能。他在手术后6个月对图像进行染色，发现未观察到角膜上皮细胞的新血管形成或降低，并且在移植物上形成角蛋白阳性角膜上皮样结构。已知角膜上皮具有较高的再生能力，但是与以前的胶原蛋白凝胶相比，再生期显着缩短，这表明脱细胞的角膜有助于上皮再生。此外，由于深角膜的脱细胞角膜移植，植入后四个月后，移植物逐渐变得更清晰，更清晰。另一方面，移植物的再上皮花费了大约三个月。在植入后6个月观察后，组织学评估显示，在移植物上分层的角蛋白阳性角膜上皮样结构。在移植物内观察到角膜实质细胞的浸润，植入的脱细胞角膜之间没有明确的边界，并且受体角膜表明正在进行移植物的重塑。此外，通过在体外播种原代猪角膜内皮细胞或人角膜内皮细胞，我们成功地重建了单层角膜内皮细胞层，该细胞形态表现出与正常角膜内皮相似的细胞形态。