KIBRAによる上皮細胞極性制御機構の解析

KIBRA分析上皮细胞极性控制机制

基本信息

批准号：
09J05317
负责人：
吉濱陽平
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J05317/
关键词：
KIBRA aPKC 上皮細胞極性エキソサイトーシスアピカル膜形成頂端膜

项目摘要

Ayu21-W171マウス(Wwc1ジーントラップマウス)の表現型を解析した。当該マウスはヘテロ接合体で胚凍結保存されていたものであり、ホモ接合体の解析は全く行われていなかった。まずヘテロ接合体のゲノムを用いWwc1(KIBRA)遺伝子がトラップされている領域をロングPCR法、インバースPCR法により解析・決定した。当該ヘテロマウスを交配しホモ接合体が得られるかどうかを解析したところ、これまでに得られた野生型、ヘテロ、ホモの個体数比は、15:22:5であり、メンデル比に照らし合わせるとホモの個体数が少なかった。ホモ接合体の脳由来タンパク質抽出液を用い、KIBRAタンパク質が完全に発現していないことを確認した。産まれてきたホモ接合体は出生時の体長が小さく、野生型と比較して力が弱かった。さらに、ホモマウスの中には尾の先端が曲がる、Wnt-PCP経路の異常と同様の表現型を示す個体が見られた。当経路に異常がある場合、通常は胎生致死であり、弱いアレルの個体に同様の表現型がみられる。したがって、KIBRA遺伝子破壊により、Wnt-PCP経路の破綻が生じている可能性が考えられる。さらに、胃がん検体を免疫染色し臨床病理学的因子との相関関係を解析したところ、KIBRAの高発現と脈管への浸潤に相関関係が見られた。また、そのような脈管への浸潤はaPKC低発現群でKIBRAが高発現している群に濃縮されていた。KIBRA単独の発現強度と予後不良には有意な相関が見られなかったが、aPKCの発現が低い群でKIBRAの高発現と予後不良に相関がみられた。KIBRAはaPKCの活性を抑制することを明らかにしており、aPKC低発現/KIBRA高発現群では、aPKCの活性が顕著に低下していると考えられる。aPKC低発現/KIBRA高発現群ではaPKC活性が顕著に低下することにより、上皮細胞の極性が破綻し、脈管への浸潤が亢進すると考えられる。

分析了AYU21-W171小鼠（WWC1基因陷阱小鼠）的表型。小鼠是杂合的，在胚胎中被冷冻保存，未对纯合物质进行分析。首先，通过长PCR和逆PCR分析了WWC1（KIBRA）基因的区域，并使用杂合子基因组确定。当杂交是否获得纯合化合物时，到目前为止获得的野生型，异型和同性恋种群的数量是15：22：5，与孟德尔人比率相比，同性恋种群的数量很小。使用纯合脑衍生的蛋白质提取物，证实了基布拉蛋白没有完全表达。出生时出生的纯合体的长度较小，并且不如野生型强大。此外，一些同源小鼠显示出类似于Wnt-PCP途径的表型，而尾尖弯曲。如果这种途径异常，通常是胎儿致死的，并且在弱等位基因的个体中观察到类似的表型。因此，Wnt-PCP途径的破坏可能是由于Kibra基因破坏而导致的。此外，当对胃癌标本进行免疫染色并分析与临床病理因素的相关性时，发现Kibra的高表达与血管脉管系统的侵袭之间存在相关性。此外，这种入侵在血管中富集了APKC表达低和高kibra表达的组。单独的基布拉（Kibra）的表达强度与预后差之间没有显着的相关性，但是Kibra的高表达与APKC表达低的组的预后不良之间存在相关性。已经揭示了Kibra抑制了APKC的活性，并且认为APKC的活性在较低的APKC表达/高基BRRA表达的组中显着降低。据认为，APKC表达低/KIBRA高表达的组中APKC活性显着降低，从而增强了上皮细胞的极性并侵入到血管脉管系统中。