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動的核マトリクスの構造及び動態の解析

动态核矩阵的结构与动力学分析

基本信息

批准号：
09J05499
负责人：
平井悠哉
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J05499/
关键词：
核小体核マトリクス動的核マトリクス天然変性領域

项目摘要

本研究では、核マトリクスの実体解明に向け、核小体内の核酸の中で核小体核マトリクスとして存在するものを決定すること、及び核小体核マトリクスタンパク質の動態解析を行うことにより「動的核マトリクス」という概念を提示することを目的としている。本年度は主に、核小体局在を示した機能未知核マトリクスタンパク質であるWDR46のキャラクタリゼーション及び機能解析を行った。まず、WDR46の核小体局在に重要な領域の大部分が、分子間相互作用のハブとされている天然変性領域であることを明らかにした。このことから、核小体は、分子間相互作用の結果形成されるダイナミックな構造体であることが示唆された。次に、免疫沈降及び質量分析を用いて、WDR46の結合タンパク質同定を試みた。その結果、PDCD11、NOL6、NOP2、DDX21、nucleolinの5種が、WDR46の主要な結合タンパク質であることが明らかになった。また、上記5種のタンパク質に対する抗体を用いて免疫沈降を行い、WDR46がどのタンパク質と複合体を形成しているかを明らかにすることを試みた。その結果、WDR46-PDCD11、WDR46-NOP2、WDR46-DDX21-nucleolinといった複合体を形成していることが示唆された。また、上記のタンパク質はRNAのプロセシング機能を持っており、特にPDCD11に関してはリボソームRNAのプロセシング機能を持っていることから、WDR46も同様にリボソームRNAのプロセシングに関与していることが強く示唆された。これまで曖昧であった核マトリクスに含まれるタンパク質の機能解明に一石を投じた上記の研究結果は非常に意義深いものであり、また、核小体の基盤となりえる構造が動的であるということを示唆する結果は、重要性に富んだものである。

This study aims to clarify the direction of nuclear DNA in vivo, determine the existence of nucleosomes in nucleosomes, and suggest the concept of "moving nucleosomes" in dynamic analysis of nucleosomes. This year, the main body of the nuclear body is unknown. The nucleosomes of WDR46 play an important role in most areas of molecular interaction. The structure of nucleosomes is formed as a result of molecular interactions. In addition, immunoprecipitation and mass analysis were used to determine the binding parameters of WDR46. The results of PDCD11, NOL6, NOP2, DDX21, nucleolin and WDR46 are mainly combined with the quality of PDCD11. The above five kinds of antibodies are used in the immune sedimentation process, and the WDR46 is used in the formation of the antibody complex. WDR46-PDCD11, WDR46-NOP2 and WDR46-DDX21-nucleolin complexes were formed. In addition, WDR46 is also responsible for maintaining the function of RNA replication, especially PDCD11, and for maintaining the function of RNA replication. The results of this study are of great significance in terms of the structure of nucleosomes and their importance.