加齢に伴うマウス肝細胞核の核マトリクス環境の変化に関わる包括的解析

小鼠肝细胞核基质环境随年龄变化的综合分析

• 批准号: 17770176
• 负责人: 星野 英人
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: National Institute of Advanced Industrial Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17770176/
• 关键词: 核マトリクス; MAR; 肝細胞

短期間に盛んに増殖するマウス生体の肝細胞と、成熟して安定期に入った成獣の機能的肝細胞では、肝細胞自体の遺伝子発現パターンとそれを支える核内環境の質的変化が予想される。このような比較的長期間維持される細胞の核マトリクス環境が、最終分化過程で如何に変化するのかを観察することは肝細胞での遺伝子発現調節を理解し、生体内での細胞の機能分化を考える上で非常に興味深い。本研究において肝細胞での核マトリクス結合配列を中心に細胞分化に伴う核マトリクス環境の変化を解明することを主たる目的とした。出生後、7日及び30日後のC57BL/6マウス肝臓細胞から核マトリクス画分を単離し、この画分から核マトリクス結合領域(Matrix-associated region, MAR)DNAを抽出し、pBSにクローニングしたプラスミドライブラリーを構築した。ライブラリーが含むMAR配列のサイズはPCRにより、約0.5k〜1.3kbであった。各ライブラリーのクローンをランダムに選び、試みに50クローンずつ塩基配列決定を行い、マウスゲノム情報と照合した結果、各ライブラリー間での共通性及び特定の遺伝子との関連性については、有意な傾向を見出せなかった。そこで、探索の方向性を見直し、MAR活性によるスクリーニングに変更した。生後30日のマウス肝由来の核マトリクスDNAを、ハイグロマイシン耐性遺伝子発現カセットの上流に挿入する形でのプラスミドライブラリーを新たに作成し直し、上記と同様に塩基配列を決定した後、マウス肝由来細胞株・Hepa1-6細胞に導入し、トランスフェクション後3週間でのコロニーの出現数をカウントするアッセイに切換えた。因みに陰性対照としては、ハイグロマイシンカセットのみのプラスミドを用い、陽性対象としては、ニワトリβグロビン遺伝子のHS4のコアインスレーター配列を用いている。現在、解析を継続中である。

For a short period of time, the production of healthy liver cells, mature liver cells and autologous liver cells can be obtained in a short period of time. The long-term maintenance of the cell cycle, the nuclear environment, the most important process of differentiation, how to improve the understanding of the cell cycle of the liver, and the ability to differentiate the cell in vivo is very interesting. The purpose of this study is to understand the main purpose of the liver cancer cell cycle in combination with the cell differentiation of the center in combination with the cell differentiation of the liver cell and the cell differentiation of the cell in the center of the study. After birth, 7 days and 30 days after birth, 7 days and 30 days after birth, the C57BL/6 cells were divided into two groups: isolation, nuclear therapy, combined with field (Matrix-associated region, MAR) DNA extraction and pBS extraction. This includes the arrangement of MAR, which is about 0.5kb ~ 1.3kbcm, in the range of 0.5kb to 1.3kbcm, in the form of MAR. Each customer does not have to choose the election, try to determine the number of rows on the basis of 50 percent of the data, and match the results of the database according to the results of the track. the commonality and connectivity among the customers of each customer, and the intention is to export the database. The direction is straight, the MAR activity is straight, the direction is straight, and the activity of the device is changed. On the 30th postnatal day after birth, the cause of the liver was determined, and the origin of the liver cell line Hepa1-6 cell line Hepa1-6 was determined after 30 days of birth. In the following 3 days, we need to know how many times we need to make sure that we can make sure that we can cut the number of dollars. Because of the fact that there are no signs of sex, such as the use of HS4, the use of the queue, the use of the line, the use of the line. Now, analyze the situation in the middle of the day.