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初期生殖細胞を制御するRNA蛋白質複合体の同定と機能解析

控制早期生殖细胞的RNA-蛋白质复合物的鉴定和功能分析

基本信息

批准号：
09J05542
负责人：
荒牧伸弥
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

前年度までの実験では、生殖細胞系列への分化能を失ったWnt3欠損型のエピブラスまたはES細胞から生殖細胞を分化誘導する際、wnt3aを添加することにより、生殖細胞系列への分化能(GermlineCompetence;以下GC)再獲得することを明らかにし、代表的なWntのシグナル伝達経路であるWnt/β-catenin経路の必要十分性を明らかにした。今年度の実験では、Wnt/β-cateninシグナル伝達経路の下流にGCを与えている因子(GC factor)があるとの仮説をたて、その検証をするために、Wnt/β-catenin経路の下流において発現が上昇する因子をマイクロアレイにより網羅的に探索した。その結果、スクリーニングされた遺伝子のうち最も強く発現上昇が認められた遺伝子であるT(brachyury)を、ESから誘導したエピブラスト様の細胞で強制的に発現させたところ生殖細胞マーカーであるBlimp1,Prdm14の発現が上昇した。またこの発現上昇はBMP4の培地への添加に依存して強められた。このことからTがGCの十分性をもっていることが示された。つぎに、Tの生殖細胞形成への必要条件を検証するためTノックアウトES細胞とTノックアウトマウスの解析を部こなった。TノックアウトES細胞からエピブラスト様の細胞を誘導して、BMP4依存的な生殖細胞の形成をしらべたところ、生殖細胞マーカーであるBlimp1の発現上昇はBMP4依存的に認められたものの、Prdm14の発現上昇は認められなかった。さらにTノックアウトマウスを解析したところBlimp1陽性の細胞はみとめられるもののその数がWTのマウスに比べて激減(胚日齢7.5のマウス胚)しており、その移動も明らかに異常をきたしていることがわかった。現在このTノックアウトマウスにおけるPrdm14の発現を検証中である。

Previous year's までの実験では, germ cell series へのdifferentiation ability をloss ったWnt3 defective type のエピブラスまたはE S cell germ cell differentiation induction, wnt3a addition, germ cell series differentiation Able (GermlineCompetence; GC below) to obtain することを明らかにし、representative なWntのシグナル伝达経路であるWnt/β-catenin経路のrequisite very natureを明らかにした. This year's の実験では, Wnt/β-cateninシグナル伝达経路の流にGCを and えているfactor (GC factor)があるとの仮说をたて、その検证をするために、Wnt/β-caten in経路の流において発appearsがRISEするfactorをマイクロアレイにより snareにExplorationした.そのRESULT, スクリーニングされた伝子のうちmost もstrongく発Now rising がcognizeめられた伝子であるT(brachyury)を, ESからInduction of the したエピブラスト様のcell で forced に発appears させたところgerm cells マーカーであるBlimp1, Prdm14 の発appears がrise した.またこの発appears to riseはBMP4の地へのaddにdepends on してstrongめられた.このことからTがGCの十性をもっていることが Show された.つぎに、TのThe necessary conditions for the formation of germ cells を検证するためTノックアウトES cells とTノックアウトマウスのanalytics を部こなった. T-cell ES cell induction, BMP4-dependent formation of germ cells, germ cellsマーカーであるBlimp1の発appears to riseはBMP4 depends on the にcognizeめられたものの, Prdm14の発appears to rise and recognizes められなかった.さらにTノックアウトマウスをanalyticsしたところBlimp1 positiveのcellsはみとめられるもののそのnumberがWTのマウスに than べて sharply reduced (embryo day 7.5のマウスEmbryo) しており, そのmovable も明らかに abnormal をきたしていることがわかった.このTノックアウトマウスにおけるPrdm14の発appearsを検证中である.