内因性ニトロ化ヌクレオシドが関与する新規シグナル伝達機構の解明

阐明涉及内源硝化核苷的新型信号转导机制

• 批准号: 09J06401
• 负责人: 斎藤 洋平
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J06401/
• 关键词: S-グアニル化; 8-ニトロ-cGMP; S-アデニル化; 8-ニトロcGMP

内因性cGMP誘導体である8-ニトロcGMPはタンパク質システインチオールと反応することでタンパク質機能を制御し、シグナルを伝達する化合物である。しかし、そのシグナル消去機構や標的タンパク質の多くは不明である。昨年度、私は8-ニトロcGMPのシグナル機構を解明することを目的とし、安定同位体ラベルした8-ニトロcGMPを合成後、細胞に投与することでその代謝物が8-アミノ-cGMPであることを明らかにした。本年度は8-アミノ-cGMP特異的抗体を作製することで、細胞内において内因性8-アミノ-cGMPが存在することを証明した。さらに、8-アミノ-cGMPは細胞内においてNO産生依存的にcGMPに変換されることも明らかとなった。プリン塩基におけるこのような脱アミノ化反応はこれまで数例の報告はあるものの、いずれも有機溶媒中での反応に限られる。生理的条件で進行する本反応は有機反応としても興味深い結果である。一方、cGMPと同様にプリン骨格を有するアデノシン誘導体のニトロ化についても生体内存在の検証を継続して行った。8-ニトロ-cAMPに加えて本年度は新たに2-ニトロ-cAMPの化学合成を行った。2-ニトロ-cAMPはシステインチオールとの反応性が低いことが判明し、2-ニトロ-cAMP自身を認識するポリクローナル抗体の作製を行った。8-ニトロ-cAMPに由来するタンパク質S-アデニル化に加えて、2-ニトロ-cAMPの細胞内における生成を免疫細胞化学染色にて確認したところ、細胞内cAMP量を過剰にした際に検出された。これまで2-ニトロ-cAMPが細胞内で生成するという報告はなく、本研究で初めて判明した。

Endogenous cGMP inductor で あ る 8 - ニ ト ロ cGMP は タ ン パ ク qualitative シ ス テ イ ン チ オ ー ル と anti 応 す る こ と で タ ン パ ク mass function を royal し, シ グ ナ ル を 伝 da す る compound で あ る. <s:1> タ <s:1>, そ そ シグナ シグナ シグナ to remove the や target of the institution タ く パ パ the excessive wood quality <s:1> is too much く や is unclear である. Last year, private は 8 - ニ ト ロ cGMP の シ グ ナ ル institutions を interpret す る こ と を purpose と し, stable isotopic ラ ベ ル し た 8 - ニ ト ロ cGMP を after synthesis, cell に cast with す る こ と で そ の metabolites が 8 - ア ミ ノ - cGMP で あ る こ と を Ming ら か に し た. This year は 8 - ア ミ ノ - the cGMP specific antibody を cropping す る こ と で, intracellular に お い て endogenous 8 - ア ミ ノ - cGMP が exist す る こ と を prove し た. さ ら に, 8 - ア ミ ノ - cGMP は intracellular に お い て NO produce dependence に cGMP に variations in さ れ る こ と も Ming ら か と な っ た. プ リ ン salt base に お け る こ の よ う な ア off ミ ノ turn against 応 は こ れ ま several の で report は あ る も の の, い ず れ も organic solvent で の anti 応 に limit ら れ る. Physiological conditions で carry out する of this antithesis 応 で organic antithesis 応と て て is of great interest で result である. With others in one party, cGMP と に プ リ ン bone を have す る ア デ ノ シ ン inductor の ニ ト ロ change に つ い て も raw body の 検 card を 継 続 し て line っ た. 8-ニトロ -camp に plus えて this year 's <s:1> new たに2-ニトロ -camp <s:1> chemical synthesis を line った. 2 - ニ ト ロ - cAMP は シ ス テ イ ン チ オ ー ル と の anti 応 sex low が い こ と が.at し, 2 - ニ ト ロ - cAMP itself を す る ポ リ ク ロ ー ナ ル を line the antibody の cropping っ た. 8 - ニ ト ロ - cAMP に origin す る タ ン パ ク mass S - ア デ ニ ル change に plus え て, 2 - ニ ト ロ - cAMP の intracellular に お け る generated を immunocytochemistry staining に て confirm し た と こ ろ, intracellular cAMP quantity を turning に し た interstate に 検 out さ れ た. こ れ ま で 2 - ニ ト ロ - cAMP で が cell to generate す る と い う report は な く, at the beginning of this study で め て.at し た.

项目成果

内因性ニトロ化ヌクレオチドの探索と代謝物研究

搜索内源硝化核苷酸和代谢物研究

• 发表时间: 2011
• 作者: 大伴真名歩;長谷川哲也;島田敏宏;斎藤洋平;斎藤洋平;斎藤洋平
• 通讯作者: 斎藤洋平

8-Amino-cGMP as a novel endogenous derivative of cGMP

8-氨基-cGMP 作为一种新型内源性 cGMP 衍生物

• 发表时间: 2011
• 作者: 大伴真名歩;長谷川哲也;島田敏宏;斎藤洋平;斎藤洋平
• 通讯作者: 斎藤洋平

Elucidation of metabolite of endogenous nitrated nucleotide using chemical probe

使用化学探针阐明内源硝化核苷酸的代谢物

• 发表时间: 2010
• 作者: 大伴真名歩;長谷川哲也;島田敏宏;斎藤洋平;斎藤洋平;斎藤洋平;斎藤洋平;斎藤洋平
• 通讯作者: 斎藤洋平

ケミカルプローブを用いた内因性ニトロ化ヌクレオチドの代謝研究

使用化学探针进行内源硝化核苷酸的代谢研究

• 发表时间: 2012
• 作者: 大伴真名歩;長谷川哲也;島田敏宏;斎藤洋平
• 通讯作者: 斎藤洋平

Chemical probes for elucidation of metabolism of nitrated nucleotide

用于阐明硝化核苷酸代谢的化学探针

• 发表时间: 2010
• 作者: 大伴真名歩;長谷川哲也;島田敏宏;斎藤洋平;斎藤洋平;斎藤洋平;斎藤洋平;斎藤洋平;斎藤洋平
• 通讯作者: 斎藤洋平