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食べ物による腸感染症のコントロール-牛乳タンパク質による予防と症状の軽減化-

控制食物引起的肠道感染 - 用牛奶蛋白预防和缓解症状 -

基本信息

批准号：
09J06778
负责人：
稲垣瑞穂
金额：
$ 0.45万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

项目摘要

ロタウイルス胃腸炎は、乳幼児のほとんどが経験する疾病であり、世界中で年間60万人近い死者が出ている。先行研究から、ロタウイルス下痢症に対し、予防には18kDaラクトフォリン(LP18K)、症状軽減化には二つの乳清主要タンパク質(α-ラクトアルブミン、β-ラクトグロブリン)が有効であることを示してきた。本年度はLP18が示すヒトロタウイルス感染阻害活性の作用機構解明を中心に検討した。等電点の異なる少なくとも4つ以上のスポットで構成される18kDaラクトフォリン(LP18)について、スポットごとのロタウイルス感染阻害活性を調べたところ、タンパク質スポットごとに異なる阻害活性を示したことから、修飾糖鎖構造が阻害活性に関与している可能性が考えられた。LP18の翻訳後修飾としてN型糖鎖(77位)とO型糖鎖(86位)が既に報告されていることから、N型糖鎖構造について、MALDI-QIT-TOFMS(AXIMA Resonance)を用いたMS^2解析を行った。その結果、非還元末端にシアル酸を1つ持つ、2,3,4本鎖のN型糖鎖多型を有すること、乳脂肪球皮膜タンパク質に特徴的なLacdiNAc(GalNAc-GlcNAc)構造を持つことが明らかとなった(Inagaki et al., Biosci.Biothech.Biochem., 74(2), 447-450, 2010)。ユニークなモチーフが見つかったことから市販LacdiNAc(GaiNAcβ1-4GlcNAc)について中和活性試験を行ったところ、二糖構造のみで40%近い阻害活性が認められた。LPが示す阻害活性の分子基盤を明らかにするため、糖鎖構造とHRV感染阻害活性との関連について詳細な検討が必要である。

Gastroenteritis is a disease that kills nearly 600,000 people worldwide in a single year. In the first study, the effect of 18kDa protein (LP18K) on the prevention of diarrhea and the effect of α-protein and β-protein on the reduction of symptoms were studied. This year, we focused on the understanding of the mechanism of action of LP18 in demonstrating its infection-blocking activity. The isoelectric point is less than 4 kDa, and the composition is 18kDa. The isoelectric point is less than 4 kDa. The isoelectric point is more than 4 kDa. LP18 was modified by N-type glycan (77-bit) and O-type glycan (86-bit), and the N-type glycan structure was analyzed by MALDI-QIT-TOFMS(AXIMA Resonance). The results show that LacdiNAc(GalNAc-GlcNAc) structures characterized by the presence of N-type carbohydrate polytypes in non-reductive terminal amino acids (1, 2, 3, 4) and lipid globules (Inagaki et al., Biosci.Biothech.Biochem., 74(2), 447-450, 2010)。The activity of LacdiNAc(GaiNAcβ1-4GlcNAc) was tested by neutralization test, and the activity of disaccharide structure was tested by 40% near inhibition test. A detailed study of the molecular basis for LP inhibition activity is necessary.