新しいカルモデュリンキナーゼカスケードを介した細胞内カルシウム情報伝達機構の解析

新型钙调蛋白激酶级联介导的细胞内钙信号传导机制分析

• 批准号: 09J08571
• 负责人: 藤本 智仁
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2011
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J08571/
• 关键词: CaMKK; Syndapin I; リン酸化酵素; GTP; STO-609

我々は、CaMKKの未知なる生理的機能を検討するため、CaMKKの基質分子をATP類似化合物を用いることで探索し、SyndapinIを発見するに至った。本研究で用いられた方法は、通常組織抽出液中に存在する内在性のタンパク質リン酸化酵素がATP類似化合物をリン酸基供与体として使用できない性質を利用したもので、ラット脳抽出液をATP類似化合物存在下に、本研究にて見いだしたATP類似化合物をリン酸基供与体として使用できるCaMKK□F230G(Phe230Gly)変異体と反応させ、抗リン酸化Thr抗体を用いてウエスタンブロットを行ない、リン酸化の上昇する基質候補タンパク質を探索するという方法である。検出された分子量50kDaのCaMKK基質候補分子を各種クロマトグラフィーを用いて部分精製後、質量分析にてSyndapinIと同定した。SyndapinIは、試験管内または遺伝子導入した培養細胞においても、CaMKKによるThr355のリン酸化が検出された。SyndapinIは、Dynaminと協調して、神経終末端におけるエンドサイトーシスによるシナプス小胞の回収および再生に関与していると考えられている。またCaMKKによるリン酸化部位の近傍にはEHD1が結合するNPFモチーフが2カ所存在し、さらにEHD1はリン脂質2重膜を用いたin vitroの実験で、小胞化を抑制する役割を持つ可能性が指摘されている。

I 々 は, CaMKK の unknown な る physiological function を beg す 検 る た め, CaMKK の matrix molecules を を with similar compounds ATP い る こ と で exploring し, SyndapinI を 発 see す る に to っ た. This research で い ら れ は た method, usually exist in extract に す る internality の タ ン パ ク qualitative リ ン acidification enzyme が similar compounds ATP を リ ン acid base body and supply と し て use で き な い nature を USES し た も の で, ラ ッ ト 脳 extract を similar compounds in the presence of ATP に, this study に て see い だ し た similar compounds ATP を リ ン Acid base body and supply と し て use で き る CaMKK/F230G (Phe230Gly) - variant と anti 応 さ せ, resisting リ ン acidification を Thr antibodies with い て ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ ト を line な い, リ ン acidification の rise す る matrix alternate タ ン パ ク qualitative を explore す る と い う method で あ る. 検 out さ れ た molecular weight 50 kda の CaMKK alternate matrix molecules を various ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を with い て part after refining, quality analysis に て SyndapinI と with fixed し た. SyndapinI は, test tube ま た は posthumous son 伝 import し た culture cell に お い て も, CaMKK に よ る Thr355 の リ ン acidification が 検 out さ れ た. SyndapinI は, Dynamin と coordination し て end, god 経 に お け る エ ン ド サ イ ト ー シ ス に よ る シ ナ プ ス vesicular の back 収 お よ び regeneration に masato and し て い る と exam え ら れ て い る. ま た CaMKK に よ る リ ン acidification parts の nearly alongside に は EHD1 が combining す る NPF モ チ ー フ が し, the existing 2 カ さ ら に EHD1 は リ ン lipid 2 heavy membrane を to use い た in vitro の be 験 で, vesicular を inhibit す cut を る service hold つ possibility が blame さ れ て い る.

项目成果

Ca^<2+>/calmodulin-dependent protein kinase kinase can utilize GTP as a phosphate donor

Ca^2/钙调蛋白依赖性蛋白激酶激酶可以利用GTP作为磷酸盐供体

• 发表时间: 2010
• 作者: Fujimoto;et al.
• 通讯作者: et al.

Identification of a novel CaMKK substrate

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2011.05.102
• 发表时间: 2011-06-24
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Fujimoto, Tomohito;Hatano, Naoya;Tokumitsu, Hiroshi
• 通讯作者: Tokumitsu, Hiroshi

ATPアナログを用いたCaMKKの新規標的基質分子の同定

使用 ATP 类似物鉴定 CaMKK 的新型靶底物分子

• 发表时间: 2011
• 作者: Someya;M.;Suzuki;G.;Watanabe;M.;Subramanian;An;Zheng G.;Lam;P.;Prudente;M.;Zakaria;M.;Viet;P.;Takahashi;S.;Tanabe;S.;藤本智仁
• 通讯作者: 藤本智仁