小胞型ATPトランスポーターの構造・機能・生理的意義に関する研究

囊泡ATP转运蛋白的结构、功能及生理意义研究

• 批准号: 09J10500
• 负责人: 澤田 啓介
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2009
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2009 至 2010
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09J10500/
• 关键词: 小胞型ATPトランスポーター; ATPシグナリング; 開口放出; 二価金属カチオン

小胞型ATPトランスポーター(VNUT)はV-ATPaseが形成したH+の電気化学的ポテンシャルを駆動力としてATPを分泌小胞内に輸送するトランスポーターである。濃縮されたATPは開口放出によって細胞外へ放出され、シグナルを伝達する。したがって、VNUTはATPシグナリングに必要不可欠な因子であり、ATP分泌の強力な分子プローブになる。ATPシグナリングにおいて、ATPの分泌小胞への濃縮と分泌機構に関する研究は遅れているが、VNUTを中心とした研究によりこの領域の研究は進むものと考えた。我々はこれまでにATPの分泌が報告されている神経、アストロサイトの分泌小胞にVNUTが発現していることを間接蛍光抗体法、免疫電子顕微鏡法にて明らかにした。また、RNA干渉法によりVNUTは分泌小胞へのATPの濃縮を担っていることを示し、ATP分泌機構は開口放出であること明らかにした。さらにVNUTは分泌小胞への二価金属カチオンの濃縮を司っていることを明らかにした。ATPが濃縮されている分泌小胞には二価金属カチオンが数十mM含まれているが、その輸送機構はほとんどわかっていなかった。我々はVNUTがMg-ATP、Ca-ATP複合体を輸送しており、二価金属カチオントランスポーターとしても機能していることを示した。現在はATP輸送の分子機構の解明をテーマとしている。ATP輸送に必須であるアミノ酸残基の特定に向けて、変異型トランスポーターの性状の解析を進めている。

The intracellular transport of ATP by V-ATPase was investigated. Concentrated ATP is released through the opening and also released outside the cell, where it is transported. VNUT is an essential factor in ATP secretion and a powerful molecule in ATP secretion. The study of ATP secretion and its concentration and secretion mechanism is carried out in this field. We report ATP secretion by indirect light antibody method and immunoelectron microscopy. The RNA stem method is used to secrete ATP from small cells. The VNUT secretes two kinds of metal ions and concentrates them on the surface. ATP is concentrated in the secretory vesicles and contains tens of mM of metal. The transport mechanism is also concentrated in the secretory vesicles. I want to show you how to transport Mg-ATP and Ca-ATP complexes. Now the molecular mechanism of ATP transport is explained. ATP transport requires specific orientation of acid residues and analysis of heterotypic characteristics.

项目成果

Identification and characterization of a vesicular nucleotide transporter

囊泡核苷酸转运蛋白的鉴定和表征

• 发表时间: 2009
• 作者: Yoshiyuki Kobayashi;Kimitaka Nakazawa;Masami Akai;Hiroshi Fujimoto;吉田沙蘭;吉田沙蘭;吉田沙蘭;澤田啓介
• 通讯作者: 澤田啓介