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遺伝子改変ブタ及びクローンブタを用いたトランスレーショナル・リサーチに関する研究

利用转基因和克隆猪进行转化研究

基本信息

批准号：
09J10707
负责人：
松成ひとみ
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Meiji University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2011
项目状态：
已结题

项目摘要

【実施内容】我々は、レトロウイルスベクターを用いてKusabira-Orange(huKO)遺伝子を導入した、全身性に赤色蛍光を示す遺伝子改変(Tg)クローンブタの作出に成功している。前年度に引き続き、このTgクローンブタの後代産仔を作出し、産仔における遺伝子伝達動態ならびにその表現型を解析した。本年度は、前年度に獲得した第1世代(G1)雄の凍結精子から、人工授精(AI)あるいは体外受精(IVF)によって第2世代(G2)産仔を作出することに成功した。G2世代は12回の分娩で77頭(雌:34頭、雄:43頭)の産仔が得られ、そのうち39頭がTgであった。Tg産仔率は50.6%(39/77)であり、メンデリズムに従ってhuKO遺伝子が後代に伝達されていることが確認された。さらに、Founder Tgクローン世代、G1、G2世代ブタのhuKO遺伝子はFISH解析により第17染色体q12領域の一箇所に挿入されていることが確認された。G2世代の個体にはFounder Tgクローンに見られた全身性赤色蛍光発現の表現型が引き継がれていた。得られたTg産仔は、靭帯再建研究、ハイドロキシアパタイトを用いた骨修復研究、新生仔肝細胞移植研究(いずれも共同研究)に使用され、赤色蛍光の細胞マーカーとしての有用性が実証された。【意義・重要性】レトロウイルスベクターにより導入されたhuKO遺伝子は2世代の有性生殖を経た後もジーンサイレンシングを受けることなく発現が維持されること、導入されたhuKO遺伝子はFISH解析により染色体上の一箇所に1コピー挿入されていることが明らかになったことは、Tg動物として系統化を図る上で重要な知見である。すなわち、継代によって導入遺伝子のコピー数が変動しない、安定的なTgブタの系統が確立されたと言える。獲得したhuKO後代産仔が整形外科、小児科、再生医療等の研究に用いられ、顕著な果が上がっていることから、本研究の最終目的であるへのhuKO Tgブタの利用が十分に達成できたと考える。凍結精子を用いた、体外受精や人工授精による増殖法も確立されたので、今後一層huKO Tgブタの研究利用が進展すると考えられる。

[Implementation content] We have successfully introduced Kusabira-Orange(huKO) gene into the body, and the red light has been shown in the gene transformation (Tg). In the past year, we have analyzed the phenotype of the offspring, the development of the offspring and the development of the offspring. This year, the first generation (G1) of male frozen sperm was obtained, artificial insemination (AI) was performed, and the second generation (G2) was successfully produced. 77 (female:34, male:43) litters were born in 12 cycles of G2 generation, and 39 litters were born in Tg. Tg farrowing rate was 50.6%(39/77). In addition, the Founder Tg gene generation, G1, G2 generation, the gene expression of the huKO gene was analyzed by FISH, and the gene expression of the region of chromosome 17 was confirmed. The individual Founder Tg of the G2 generation was observed in the phenotype of systemic red fluorescence. The usefulness of red light in the study of reproduction, bone regeneration, bone repair and neonatal liver transplantation was demonstrated. [Significance and Importance] The introduction of huKO genes into the second generation of sexual reproduction, the subsequent generation, the subsequent generation of sexual reproduction, the subsequent generation, the subsequent generation The number of incoming genes is changing and the stability of the Tg system is established. The ultimate goal of this study is to achieve the goal of using the HuKO Tg in plastic surgery, pediatrics, and regenerative medicine. The use of frozen sperm, in vitro fertilization and artificial insemination, the establishment of the next layer of huKO Tg research and utilization, and the development of new technologies.