イネにおける高温ストレス応答に対する植物SUMO修飾機構の細胞機能研究

水稻响应高温胁迫的植物SUMO修饰机制的细胞功能研究

• 批准号: 10F00113
• 负责人: 伊藤 紀美子
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10F00113/
• 关键词: SUMO; SUMOylation; rice; thermostress; nuclear domain; Proteomics; SUMOYlation; thermotolerance

本年度は質量分析器によるSUMO標的タンパク質の同定効率を高めること、異なるSUMO分子種間の標的タンパク質の同定を目標として研究を行った。標識タンパクを融合したSUMO分子を構成的に発現させるベクターを導入したイネ培養細胞を作成し、通常条件または高温条件に曝露した後、抗タグ抗体を用いた共免疫沈降法によりSUMOと直接・間接的に相互作用するタンパク質を精製し、質量分析器(LC-MS/MS)により標的タンパク質を同定した。この際、2種の濃度の分離ゲルを用いてサイズ分画し、ゲル内消化後のショットガンMS/MSを行う事により、同定効率を高める事に成功した。また、同様の方法により互いに異なるSUMO分子種、SUMO1、SUMO2、SUMO3について、比較解析を行った。その結果、SUMO1、SUMO2、SUMOO3と直接・間接的に相互作用するタンパク質として同定された約700のタンパク質のうち、いずれのSUMOにも相互作用するタンパク質が約250あった。また、SUMO2に相互作用するタンパク質のうちSUMO2特異的なものは10%のみであり、残りの大半はSUMO1と共通するターゲットであったことから、SUMO1/2は競合的に標的タンパク質に結合し、その際、SUMO1の親和性がより高いと考えられた。また、高温ストレスへの応答について、タグ抗体を用いた共免疫沈降後のタンパク質の抗SUMO1/2抗体によるウェスタンブロッティングにより解析した。その結果、高温処理によりSUMO1/2に結合・相互作用するタンパク質の増大とともに、フリーのSUMO1/2もその発現が増大する事が明らかになった。一方、SUMO3は構成的に発現していたが、標的タンパク質との結合は高温条件下で特異的に誘導されていた。

This year は quality analyzer に よ る SUMO mark タ ン パ ク qualitative の be sharper rate high を め る こ と, different な る type molecular species の mark タ ン パ ク qualitative の を goal set with と し を line っ て research た. Logo タ ン パ ク を fusion し た type of molecular を に 発 now さ せ る ベ ク タ ー を import し た イ ネ culture cell を made し, usually condition ま た は に high temperature exposure し た after, resisting タ を グ antibody with い た were immune to sink method に よ り SUMO と interact directly, indirectly に す る タ ン パ ク を refined し, quality analyzer (LC - MS/MS)によ, marked with タ タ パ パ, the particle を is fixed with <s:1> た. こ の interstate separation, concentration of two の の ゲ ル を with い て サ イ ズ painting し, ゲ after digestion in ル の シ ョ ッ ト ガ ン MS/MS を doeth う に よ り, with fixed working rate high を め る matter に success し た. ま た, with others in の way に よ り mutual い に different な る SUMO molecules, SUMO1, SUMO2, SUMO3 に つ い て line, comparative analytic を っ た. そ の results, SUMO1, SUMO2, SUMOO3 と interact directly, indirectly に す る タ ン パ ク qualitative と し て with fixed さ れ た about 700 の タ ン パ ク qualitative の う ち, い ず れ の SUMO に も interaction す る タ ン パ ク qualitative が about 250 あ っ た. ま た, SUMO2 に interaction す る タ ン パ ク qualitative の う ち SUMO2 specific な も の は 10% の み で あ り and residual り の most は SUMO1 と common す る タ ー ゲ ッ ト で あ っ た こ と か ら, SUMO1/2 は competition に mark タ ン パ ク に combining し, そ の interstate, SUMO1 の affinity が よ り high い と exam え ら Youdaoplaceholder0. ま た, high-temperature ス ト レ ス へ の 応 answer に つ い て, タ を グ antibody with い た were immune to sink after の タ ン パ ク qualitative の SUMO1 resistance / 2 antibodies に よ る ウ ェ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り parsing し た. そ の results, high temperature 処 に よ り SUMO1/2 に combination, interaction す る タ ン パ ク qualitative の raised large と と も に, フ リ ー の SUMO1/2 も そ の 発 が now raised large す る matter が Ming ら か に な っ た. Consisting of one party, the SUMO3 は に 発 now し て い た が, mark タ ン パ ク qualitative と の combining は で specific に under the condition of high temperature induced さ れ て い た.