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新規RNA感受性蛍光素子を用いたアメフラシ感覚神経細胞内mRNA動態観察

使用新型 RNA 敏感荧光装置观察海兔感觉神经元的 mRNA 动态

基本信息

批准号：
10F00212
负责人：
見学美根子 (2011)
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University (2011)The Institute of Physical and Chemical Research (2010)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2011
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10F00212/
关键词：
励起子相互作用蛍光イメージング蛍光色素 mRNA アメフラシ

项目摘要

神経細胞内のmRNA動態観察において、RNA配列の染め分け、つまりマルチカラー核酸解析は、mRNAのライブセルイメージングの原点としてどうしても確立したい技術である。それが可能になれば、アメフラシの神経細胞の中でのmRNAのトラフィックスのモニタリングへ応用できるようになる。本年度は、まずモデル系として、励起子制御機構にのっとった新規蛍光プローブ群を用いて、ヒトガン細胞(HeLa細胞)およびマウス神経細胞(海馬から取り出す)における新規mRNA蛍光検出法へと展開した。ここで検討されたプローブは、チアゾールオレンジ色素の色素間励起子結合効果を利用しており、標的のmRNAと結合した場合にだけ488nm励起により強い蛍光を発する。われわれは、まず細胞内mRNA分布の静的観察のために、このプローブを用いた蛍光in situハイブリダイゼーション法を確立した。この方法は、ガラスプレート上に固定化した細胞に対し、新規蛍光プローブを含む溶液を加えるだけである。これにより、従来までの蛍光in situハイブリダイゼーション法で用いられてきた工程を大きく簡便化することができた。この新規観察法を通じて、mRNAが細胞内でどのように分布しているかを蛍光発光によって確認することができた。この方法は、次の段階として目指すべきである神経細胞内のmRNAのトラフィックの観察に有用であると思われ、引き続き研究を進めることによって、新たな蛍光観察法の確立を目指したい。

mRNA dynamic detection in neurons, RNA alignment, nucleic acid analysis, mRNA alignment, origin, and establishment of techniques All these may be related to the mRNA expression in the neurons of the brain. This year, the new regulation of mRNA expression in HeLa cells and hippocampus cells was developed. This is the first time that the expression of the protein has been detected by fluorescence spectroscopy. The expression of mRNA in the cells was determined by the method of "in situ". The method includes the following steps: immobilizing cells, adding light to the solution, This is a great way to simplify the project. This new method of detection allows for the distribution of mRNA within the cell and for the identification of mRNA by light emission. This method is useful for the detection of mRNA in neurons at different levels and for the establishment of a new method for detecting mRNA in neurons.