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ユビキチン化依存的タンパク分解経路におけるアラビドプス14－3－3タンパクの役割

拟南芥14-3-3蛋白在泛素化依赖性蛋白降解途径中的作用

基本信息

批准号：
10F00509
负责人：
申怜
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至 2012
项目状态：
已结题

项目摘要

多くのタンパク質はSCF(SKIP1/Cullin/F-box)複合体およびユビキチンを必要とする26Sプロテアソーム依存的タンパク質分解メカニズムを介して分解する。Arabidopsisでは550以上のF-boxタンパク質が確認されており、E3リガーゼとしての役割を果たすものがいくつかある。この研究では、14-3-3タンパク質の制御におけるF-boxタンパク質の役割を解明するため、14-3-3タンパク質(kappa、chi、psi)と相互作用するタンパク質候補、Arabidopsis F-boxタンパク質のAtSKIP18およびAtSKIP31を選抜した。AtSKIP18とAtSKIP31の様々な部分欠損変異体を用いてE3リガーゼ活性を確認した。AtSKIP18では4つのセリンが存在する領域(57-120a.a)およびC末端領域(221-317a.a)でE3リガーゼ活性が無くなった。AtSKIP31ではN-末端領域(1-72a.a)でのE3リガーゼ活性が検出されなかった。これはAtSKIP18とAtSKIP31のE3活性制御が異なることを示す。更にyeast two hybridとインビトロプルダウンによってAtSKIPと14-3-3タンパク質間の相互作用を確認した。そしてAtSKIPタンパク質のC-末端領域が14-3-3との相互作用にとって重要であることを示唆する結果を得た。AtSKIP18とAtSKIP31の発現パターンを調べるため、異なる発達段階および非生物学的ストレス処理がされたArabidopsisの組織を分析した。AtSKIP18とAtSKIP31の転写量は花で高く、根では最も低いことが分かった。また、乾燥ストレスでの変化は見られなかったが、カリウム欠乏条件下および塩ストレス条件下では転写量の増加が見られた。これはAtSKIP18とAtSKIP31が非生物学的ストレスに関連するタンパク質を組織特異的にユビキチン化することを示唆する。これら研究結果に基づいて、我々は、AtSKIP18とAtSKIP31がタンパク分解メカニズムを介して14-3-3タンパク質の制御に重要な働きをしている可能性を見出した。

多くのタンパク性はSCF (SKIP1/Cullin/F-box) complex およびユビキチンをNecessary とする26S プロテアソームdepends on the タンパク性 decomposition メカニズムを Introduction して decomposition する. Arabidopsisでは550 and above F-box qualityがconfirmationされており, E3 リガーゼとしての俪 Cut を Fruit たすものがいくつかある.この研究では, 14-3-3タンパク性のcontrol におけるF-box タンパクquality のservice cut を解明するため, 14- 3-3 kappa, chi, psi and interactive quality candidates, Arabidopsis F-boxタンパクqualityのAtSKIP18およびAtSKIP31を选抜した. AtSKIP18 and AtSKIP31 are partially defective variants and their activity has been confirmed using the E3 strain. AtSKIP18 では4 つのセリンがexistent する domain (57-120a.a) およびC-terminal domain (221-317a.a) でE3 リガーゼActivity が无くなった. AtSKIP31's N-terminal domain (1-72a.a) is active and active. The E3 activity control of AtSKIP18 and AtSKIP31 is different from that of AtSKIP18 and AtSKIP31. More details on the two hybrid hybrids.そしてAtSKIPタンパクqualityのC-terminal domainが14-3-3とのinteractionにとってimportantであることをshows唆するRESULTSをgetた. AtSKIP18 and AtSKIP31 are now in the same stageおよび Non-biological ストレス processing がされたArabidopsis の organizational を analysis した. The writing volume of AtSKIP18 and AtSKIP31 is high and low, and the root is high and low.また、Drying ストレスでの変化は见られなかったが、カリウムowed Under the lack of conditions, the amount of writing is increased, and the amount of writing is increased.これはAtSKIP18 and とAtSKIP31 are non-biological ストレスにrelated するタンパク性をtissue-specific にユビキチン化することを Show する.これらResearch resultsにbasedづいて、我々は、AtSKIP18とAtSKIP31がタンパクDecompositionメカニズムを开して14-3-3タンパク性のcontrolにimportantな働きをしているpossibilityを见出した.