癌抑制遺伝子CHIPの発現制御機構の解析

抑癌基因CHIP表达调控机制分析

• 批准号: 10J00414
• 负责人: 大家 祥平
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: University of Tsukuba
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010 至 2012
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10J00414/
• 关键词: 乳癌; 癌抑制遺伝子CHIP; ピルビン酸キナーゼM2(PKM2); 転写; 癌; 癌抑制遺伝子; DNAメチル化修飾

[研究目的1本申請者らは乳癌の増殖と転移の両経路を抑制する因子としてCHIP遺伝子を同定した。そして、ヒト乳癌組織におけるCHIP遺伝子の発現解析から、癌の悪性化にはCHIP遺伝子の発現低下が関与していることを突き止めた。また、CHIP遺伝子プロモーターのDNAメチル化修飾がCHIP遺伝子の発現低下を招き、乳癌の悪性化を促進させていることを見出した。しかし、プロモーターにDNAメチル化修飾を誘導するメカニズムは不明な点が多く、CHIP遺伝子不活化のプロセスは謎である。そこで、本申請者は、CHIPプロモーターにおいて、DNAメチル化修飾を誘導する転写抑制因子を探索し、CHIP遺伝子不活化の分子メカニズムを明らかにすることを目的とし、研究を進める。[本年度の研究実施計画]本年度までの研究成果から、癌抑制遺伝子CHIPのプロモーター領域結合タンパク質として、ピルビン酸キナーゼ遺伝子(PKM2)とLIRP130遺伝子を同定し、PKM2がCHIP遺伝子の転写レベルに影響を及ぼすことを確認した。本年度は、CHIP遺伝子のプロモーター領域に、PKM2が実際に結合することができるのか、大腸菌のPKM2精製タンパク質と、CHIP遺伝子プロモーター領域のDNAオリゴヌクレオチドを使ったin vitro DNA-タンパク質間結合を確認した。本研究は、PKM2にDNA結合能があることを示唆する新しい知見であり、PKM2の転写因子として新機能を示唆することにつながった。また、PKM2のsiRNAを用いて、PKM2による癌抑制遺伝子cHIPの転写制御を低下させた時の、乳癌細胞株の悪性度(遊走性と浸潤性)を評価した。その結果、PKM2のノックダウンにより、CHIP遺伝子の発現増加が誘導され、乳酸細胞株の悪性度が低下したことが示唆された。

[Objective 1] The present applicant has identified factors that inhibit breast cancer growth and migration and that regulate CHIP gene expression. Analysis of CHIP gene expression in breast cancer tissue and cancer differentiation The DNA modification of CHIP gene reduces the development of CHIP gene and promotes the development of breast cancer. DNA modification is induced by DNA mutation, and CHIP mutation is not activated. The present applicant intends to explore and research CHIP gene expression, DNA gene modification, gene inhibition factor, CHIP gene inactivation, and molecular gene expression. [Research Implementation Plan for the Year] This year's research results include the identification and confirmation of the impact of PKM2 on CHIP gene expression in the field of cancer suppressor CHIP gene expression. This year, we confirmed the presence of PKM2 in vitro, the purification of PKM2 in Escherichia coli, and the presence of DNA in vitro in CHIP gene. In this study, PKM2 DNA binding ability was shown to be novel, and PKM2 DNA binding factor was shown to be novel. To evaluate the activity of PKM2 siRNA, PKM2 mRNA and protein expression in breast cancer cell lines (mobility and invasiveness). The results showed that PKM2 gene expression increased and the activity of lactic acid cell line decreased.

项目成果

核小体タンパク質NMLによる個体エネルギー調節機構の解析

核仁蛋白NML解析个体能量调节机制

• 发表时间: 2012
• 作者: Oie S;Matsuzaki K;Yokoyama W;Murayama A;Yanagisawa J;大家祥平
• 通讯作者: 大家祥平

核小体タンパク質NMLによる個体でのエネルギー調節機構の解析

核仁蛋白NML解析个体能量调节机制

• 发表时间: 2011
• 作者: Oie S;Matsuzaki K;Yokoyama W;Murayama A;Yanagisawa J;大家祥平;大家祥平
• 通讯作者: 大家祥平